單柱二維液相色譜復(fù)性變性溶菌酶及胰腺癌血清中腫瘤標(biāo)志物的制備.pdf

1、高效液相色譜法是生物大分子分離純化的手段，也是蛋白復(fù)性的有效方法。液相色譜的核心是色譜填料，它在蛋白分離和蛋白折疊液相色譜(PFLC)中起著重大作用。本文主要研究了用單柱二維液相色譜填料分別在弱陽(yáng)離子交換色譜(WCX)和疏水相互作用色譜(HIC)模式下對(duì)還原變性溶菌酶的復(fù)性，同時(shí)采用離線單柱二維液相色譜對(duì)蛋清中的蛋白進(jìn)行了分離純化，以及采用SEC-RPLC制備胰腺癌血清中腫瘤標(biāo)志物。主要包括以下4個(gè)部分。
　　 1文獻(xiàn)綜述：主要

2、介紹了二維液相色譜和單柱二維液相色譜的概念及應(yīng)用，論述蛋白折疊液相色譜法的原理，總結(jié)了溶菌酶復(fù)性的研究進(jìn)展及胰腺癌早期診斷的研究進(jìn)展，其中共引用文獻(xiàn)64篇。
　　 2首次使用一根色譜柱分別在弱陽(yáng)離子交換色譜(WCX)和疏水色譜(HIC)兩種模式下對(duì)還原變性溶菌酶的折疊進(jìn)行了研究。詳細(xì)討論了在兩種分離模式下流動(dòng)相中脲濃度，GSH/GSSG比例，pH，蛋白濃度及流動(dòng)相流速對(duì)還原變性溶菌酶復(fù)性效率的影響。結(jié)果表明，使用此二維色譜柱，可

3、分別在WCX和HIC模式下實(shí)現(xiàn)對(duì)還原變性溶菌酶的復(fù)性。在WCX模式下復(fù)性時(shí)，在蛋白濃度高達(dá)40 mg/mL的條件下，得到活性回收率和質(zhì)量回收率分別為94.6％和96.0％，而在HIC模式下，蛋白濃度為5 mg/mL時(shí)，相應(yīng)的活性回收率和質(zhì)量回收率分別為79.8％和96.1％。表明該二維色譜柱能夠應(yīng)用于蛋白折疊液相色譜，可分別在WCX和HIC模式下對(duì)變性蛋白進(jìn)行折疊。該二維色譜柱有望成為實(shí)現(xiàn)蛋白折疊液相色譜法的首選色譜柱。
　　

4、3首次使用一根色譜柱，采用離線單柱二維液相色譜技術(shù)對(duì)雞蛋清中的3種蛋白質(zhì)進(jìn)行了的分離純化。第一維采用離子交換色譜模式，可一步分離純化得到抗生物素蛋白和溶菌酶，其純度分別達(dá)到95.3％和95.6％。將在離子交換模式下不保留的組分再通過(guò)疏水色譜模式進(jìn)行第二維分離，通過(guò)條件優(yōu)化，一步可分離純化得到球蛋白G2，其純度可達(dá)到98.1％。而卵白蛋白和伴白蛋白則不能夠完全分離。結(jié)果表明，采用單柱二維液相色譜技術(shù)，利用一根色譜柱就可以完成對(duì)復(fù)雜樣品的二