應(yīng)用核素標(biāo)記結(jié)合納升級(jí)反相液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩選鑒定胰腺癌血清診斷標(biāo)志物.pdf

1、目的:胰腺癌是一種常見(jiàn)的惡性消化道腫瘤，病情隱匿，且快速發(fā)展，在疾病早期難以得到確診。胰腺癌惡性程度高，其五年生存率不到6％，因此只有早期診斷，才有望得到較好的治療效果。然而，現(xiàn)有的胰腺癌腫瘤標(biāo)記物尚不能滿足臨床需求，尋找理想的用于早期診斷或判斷預(yù)后的胰腺腫瘤標(biāo)志物，具有非常重要的意義。其次，外科手術(shù)是現(xiàn)有治療胰腺癌的一種有效方法，對(duì)其進(jìn)行根治性切除手術(shù)有可能達(dá)到治愈效果，改善胰腺癌的預(yù)后。胰腺癌的早期診斷不僅可以提高預(yù)后，還可以為術(shù)前

2、可切除性評(píng)估提供可靠參考。研究表明:人血清中的蛋白質(zhì)成份會(huì)在疾病早期階段有一定變化，分析血清蛋白成份變化對(duì)尋找相關(guān)疾病的生物標(biāo)識(shí)物有較大幫助，本研究應(yīng)用蛋白組學(xué)相關(guān)方法對(duì)16例胰腺癌患者、16例良性胰腺疾病患者和16正常健康人的外周血進(jìn)行檢測(cè)分析，篩選并鑒定可能存在的胰腺癌血清中特異的早期診斷標(biāo)記物。
　　方法:同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)量技術(shù)（isobaric tags for relative and absolute quanti

3、tation，iTRAQ）是目前應(yīng)用非常廣泛的蛋白質(zhì)組相對(duì)定量方法，基于iTRAQ技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究具有樣品要求量低、靈敏度和準(zhǔn)確度高、可觀察蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)變化的顯著優(yōu)點(diǎn)。使用核素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量（iTRAQ）技術(shù)結(jié)合納升級(jí)反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(nanoflow Reversed-phase Liquid Chromatography-tandem MassSpectrometry, nanoRPLC-MS/MS)，對(duì)2012年3月

4、-2013年11月入院的16例胰腺癌患者、16例良性胰腺疾病患者（包括:慢性胰腺炎8例，胰腺漿液性囊腺瘤2例，胰腺粘液性囊腺瘤1例，胰腺假性囊腫3例，急性胰腺炎治療后2例）和16例正常健康人的血清進(jìn)行差異蛋白組學(xué)分析，篩選特異性的血清腫瘤標(biāo)志物。
　　結(jié)果:通過(guò)比較分析胰腺癌組，胰腺良性疾病組，正常健康人組的血清，質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示，胰腺癌和胰腺良性對(duì)照組中共篩選和鑒定出469種蛋白，其中45個(gè)差異表達(dá)的蛋白，有19種蛋白在胰腺癌組

5、較良性胰腺疾病組表達(dá)升高，降低的蛋白有26種;胰腺良性疾病同正常對(duì)照組中共篩選和鑒定出473種蛋白，其中有差異表達(dá)的蛋白46種，胰腺良性疾病較正常升高的蛋白有25種，降低的蛋白有21種。同胰腺良性疾病組比較，我們篩選并成功鑒定出17種差異蛋白，分別為Seprease、α-1B糖蛋白(Alpha-1B-glycoprotein)、角蛋白Ⅰ型細(xì)胞骨架14(Keratin，typeⅠ cytoskeletal14)、Ficolin-3、過(guò)氧化

6、氫酶（Catalase）、基膜聚糖(Lumican)、聚免疫球蛋白受體(Polymeric immunoglobulin receptor， PIGR)、載脂蛋白A-Ⅱ(Apolipoprotein A-Ⅱ，ApoA-Ⅱ)、血清淀粉樣蛋白A-4蛋白(Serumamyloid A-4 protein，SAA4)、血小板活化因子乙酰水解酶（Platelet-activatingfactor acetylhydrolase，PAFA）、巨噬細(xì)

7、胞集落刺激因子1受體（Macrophagecolony-stimulating factor1 receptor，MCSFR-1）、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2（Insulin-like growth factor-binding protein-2，IGFBP-2）、腱生蛋白-Ⅹ(Tenascin-Ⅹ)、α-2-HS-糖蛋白、組織蛋白酶D(Cathepsin D)、泛酰巰基乙胺酶(Pantetheinase)。其中有6種在胰腺癌組表達(dá)

8、顯著降低，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，分別為Seprease、α-1B糖蛋白(Alpha-1B-glycoprotein)、角蛋白Ⅰ型細(xì)胞骨架14(Keratin，typeⅠcytoskeletal14)、Ficolin-3、過(guò)氧化氫酶(Catalase)、基膜聚糖(Lumican)，但上述6種蛋白在胰腺良性疾病組卻呈高表達(dá);11種在胰腺癌組血清中高表達(dá)，分別是聚免疫球蛋白受體(Polymeric immunoglobulin

9、 receptor，PIGR)、載脂蛋白A-Ⅱ(Apolipoprotein A-Ⅱ，ApoA-Ⅱ)、血清淀粉樣蛋白A-4蛋白（Serum amyloid A-4 protein，SAA4）、血小板活化因子乙酰水解酶(Platelet-activating factor acetylhydrolase，PAFA)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子1受體(Macrophage colony-stimulating factor1 receptor，M

10、CSFR-1)、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(Insulin-like growth factor-binding protein-2，IGFBP-2)、腱生蛋白-Ⅹ(Tenascin-Ⅹ)、α-2-HS-糖蛋白、組織蛋白酶D(Cathepsin D)、泛酰巰基乙胺酶(Pantetheinase)。分析胰腺癌患者組、良性胰腺疾病患者組和正常健康人群組血清中篩選出的蛋白，我們發(fā)現(xiàn):IGFBP-2、腱生蛋白-Ⅹ、AHSG、PIGR、ApoA