

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、蛋白質(zhì)組學(xué)是后基因組時(shí)代的一個(gè)新興領(lǐng)域,其理論和技術(shù)的發(fā)展為腫瘤標(biāo)志物的研究提供了新的方向。臨床研究顯示,對惡性腫瘤而言早期診斷的意義遠(yuǎn)大于現(xiàn)有的任何一種治療方案,但現(xiàn)有常用標(biāo)志物對早期無癥狀階段腫瘤的及時(shí)發(fā)現(xiàn)能力仍遠(yuǎn)不能令人滿意。所以尋找靈敏度、特異度均高,檢測方便,無創(chuàng)的標(biāo)志物用于腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷己成為當(dāng)務(wù)之急。蛋白質(zhì)組學(xué)研究的關(guān)鍵在于蛋白質(zhì)的分離和鑒定,如何有效去除樣品中高豐度蛋白,分離富集低豐度蛋白,這不僅是蛋白質(zhì)組學(xué)樣品
2、制備重要的研究內(nèi)容,也是制約蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)展的瓶頸問題。近年來,多維液相色譜(multidimensional HPLC,MDLC)以其分離效率高、重復(fù)性好、方法靈活多樣,且易與質(zhì)譜聯(lián)用實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究。本研究應(yīng)用多維色譜和基體輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(matrix assisted laser desorption ionization time 0fflight mass spectrometry,MAD
3、LI-TOF MS)離線聯(lián)用對人血清蛋白質(zhì)組學(xué)樣本分離和檢測,并通過該技術(shù)篩選了胰腺癌患者血清和組織中的差異表達(dá)蛋白質(zhì),取得了比較滿意的結(jié)果。 本論文包括以下四個(gè)部分: 1.文獻(xiàn)綜述。概括的介紹了蛋白質(zhì)組學(xué)及其研究的內(nèi)容、方法以及研究現(xiàn)狀,以及目前蛋白質(zhì)組學(xué)在胰腺癌的研究進(jìn)展以及重要意義。 2.疏水型色譜餅對人血清蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的快速分離與制備。建立了疏水型色譜餅(10 mm×20 mm LD.)與反相色譜(RP
4、LC)離線二維色譜快速分離制備人血清蛋白質(zhì)組學(xué)樣品,并用基體輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)進(jìn)行檢測的方法。以四種標(biāo)準(zhǔn)蛋白的稀溶液為模型進(jìn)行分離富集,得到細(xì)胞色素-C(Cyt-C)與肌紅蛋白(Myo)的檢出限均為1 pmol· L-1,溶菌酶(Lys)和胰島素(Ins)為0.1 pmol·uL-1。將此方法用于人血清蛋白質(zhì)組學(xué)樣品的分離與制備,隨著血清處理量增大,質(zhì)譜可檢出組分與其信號強(qiáng)度均增加,當(dāng)血清處理量達(dá)到
5、l mL時(shí),可檢出低豐度蛋白質(zhì)或多肽285個(gè)(15 kDa以下)。研究中以Cyt-C為內(nèi)標(biāo),將其1 g加入到0.5 mL血清中,用上述方法在分離富集所加入的低豐度Cyt-C上取得了很好的效果。以上結(jié)果表明,用疏水型色譜餅與RPLC二維色譜聯(lián)用技術(shù)不僅可對血清樣品中低豐度蛋白進(jìn)行有效的分離和富集,而且一次樣品處理量大,顯著提高了低豐度蛋白的分析、檢測水平。 3.離線體積排阻.反相色譜.質(zhì)譜(SEC-RPLc-MS)對胰腺癌患者血
6、清腫瘤標(biāo)志物篩選的研究。用體積排阻色譜(size exclusion chromatography,SEC)對變性后血清中的蛋白按其分子量的大小進(jìn)行分離并富集,從而消除了高豐度大分子量蛋白質(zhì)對小分子量蛋白/多肽的影響,提高了低豐度小分子量蛋白的檢出率。經(jīng)過反相色譜(reverse phase chromatography,RPLC)進(jìn)一步分離后,并用MALDI-TOF MS在未酶解的情況下直接分析檢測。結(jié)果顯示:該技術(shù)手段重復(fù)性高、穩(wěn)定
7、性好,是較為理想的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究平臺(tái),通過對胰腺癌患者術(shù)前、術(shù)后血清的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比分析,并以健康人血清檢測結(jié)果作為對照,篩選出一種顯著差異蛋白分子。這一m/z為5734 D的蛋白質(zhì)/多肽在胰腺癌患者血清中呈現(xiàn)明顯上調(diào),敏感度達(dá)到78.38%(29/37),特異度達(dá)到100%(6/6),有望作為胰腺癌診斷的標(biāo)志物。 4.離線SEC-RPLC-MS對胰腺癌變組織蛋白質(zhì)組樣品的研究。用SEC-RPLC分別對使用兩種不同方法提取的胰
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- SELDI血清蛋白質(zhì)譜腫瘤標(biāo)志物挖掘方法研究.pdf
- 分泌蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選新的胰腺癌腫瘤標(biāo)記物.pdf
- 腎母細(xì)胞瘤血清蛋白質(zhì)標(biāo)志物的篩選及鑒定.pdf
- 胰腺癌血漿診斷標(biāo)志物譜的篩選及驗(yàn)證.pdf
- 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)篩選胰腺癌早期診斷血清標(biāo)記物.pdf
- 人類骨肉瘤血清診斷標(biāo)志物的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 應(yīng)用血清蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選和鑒定舌癌腫瘤抗原.pdf
- 胰腺癌血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 蛋白質(zhì)組學(xué)中的多維液相色譜—質(zhì)譜技術(shù)研究及其在胰腺癌標(biāo)志物篩選中的應(yīng)用.pdf
- 胰腺癌血漿蛋白質(zhì)組學(xué)研究及候選腫瘤標(biāo)志蛋白的驗(yàn)證與評價(jià).pdf
- 血清miRNAs作為胰腺癌診斷腫瘤標(biāo)志物的初步研究.pdf
- 胰腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物檢測的臨床價(jià)值研究.pdf
- 肺腺癌腫瘤標(biāo)志物初步篩選及鑒定.pdf
- 喉癌及下咽癌血漿腫瘤標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)篩選及驗(yàn)證.pdf
- 蛋白質(zhì)組學(xué)在肝膽管細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物中的初步研究.pdf
- 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)探討胰腺癌血清診斷標(biāo)記物.pdf
- 應(yīng)用蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)篩選胰腺癌血清特異性標(biāo)志蛋白.pdf
- 激素性股骨頭壞死血清蛋白標(biāo)志物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf
- 基于血清蛋白質(zhì)組學(xué)日本血吸蟲病診斷標(biāo)志物的篩選及其免疫應(yīng)答的研究.pdf
- 應(yīng)用蛋白芯片篩選乳腺癌腫瘤相關(guān)標(biāo)志物的研究.pdf
評論
0/150
提交評論