百合未授粉子房離體培養(yǎng)及胚胎學(xué)研究.pdf

1、本試驗(yàn)以亞洲百合雜種系中的品種布魯拉諾、完美表演、莫娜、精粹、黃巨人，麝香百合雜種系中的品種羅瑞拉，東方百合雜種系的品種西伯利亞和索邦以及兩個(gè)野生種蘭州百合與卷丹共10種百合為試材，對(duì)未授粉子房進(jìn)行離體培養(yǎng)，較系統(tǒng)的研究了影響子房離體培養(yǎng)再生的因素，得到了一些不同倍性的再生植株，并對(duì)離體條件下的胚囊發(fā)育進(jìn)行了胚胎學(xué)觀察，主要結(jié)果如下： 觀察和研究了不同品種百合其花蕾長(zhǎng)度、子房大小與小孢子發(fā)育時(shí)期的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)同在小孢子單核早期，蘭

2、州百合的子房最小，在0.65～0.80 cm之間；其次為黃巨人，在0.85～1.00cm之間；羅瑞拉的稍大，在1.15～1.30cm之間；索蚌的最大，在1.30～1.45cm之間。試驗(yàn)了不同方法，發(fā)現(xiàn)百合花蕾用自來(lái)水沖洗30min后不消毒也可同樣達(dá)到污染率很低的效果。 對(duì)百合未授粉子房離體培養(yǎng)誘導(dǎo)和分化的諸多因素進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)東方百合雜種系品種的百合子房愈傷組織誘導(dǎo)率最高，平均為88.6％。亞洲百合雜種系品種黃巨人子房不帶花柱

3、平放接種(CK)的再生植株誘導(dǎo)率最高，為92.3％。接種胚囊發(fā)育在大孢子母細(xì)胞時(shí)期的黃巨人子房，其再生植株誘導(dǎo)率最高，達(dá)89.8％。低溫預(yù)處理和高濃度的2,4-D溶液預(yù)處理對(duì)黃巨人子房離體培養(yǎng)再生植株誘導(dǎo)率沒(méi)有顯著提高。黃巨人子房離體培養(yǎng)誘導(dǎo)再生植株的最佳培養(yǎng)基為改良MS+2,4-D5.0 mg·L<'-1>+KT4.0mg·L<'-1>+3.0％蔗糖，誘導(dǎo)率可達(dá)100％。羅瑞拉百合子房培養(yǎng)最佳愈傷組織分化培養(yǎng)基為MS+NAA0.3mg

4、·L<'-1>：BA1.5mg·L<'-1>，分化率為33.3％。暗培養(yǎng)不利于子房培養(yǎng)的再生植株誘導(dǎo)，但可有效的降低羅瑞拉百合子房的褐化，大大提高愈傷組織分化率。 對(duì)百合未授粉子房離體培養(yǎng)的再生植株的增殖和生根進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)黃巨人的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg·L<'-1>+：BA1.5mg·L<'-1>，增殖系數(shù)為2.16；索蚌在四種培養(yǎng)基中的增殖系數(shù)相近，為1.80～2.33；羅瑞拉的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+NAA

5、0.5mg·L<'-1>+BA2.5mg·L<'-1>，增殖系數(shù)為2.36；蘭州百合的最佳增殖培養(yǎng)基為MS+NAA0.4mg·L<'-1>+BA2.0mg·L<'-1>，增殖系數(shù)為4.67。黃巨人和索蚌在1/2MS+IBA0.5mg·L<'-1>+活性碳1000mg·L<'-1>培養(yǎng)基中的生根條數(shù)要比在MS+NAA0.2mg·L<'-1>中少，而羅瑞拉和蘭州百合與它們相反。 觀察了黃巨人子房培養(yǎng)的38株再生植株根尖染色體數(shù)目，其

6、中二倍體、非整倍體、單倍體和三倍體所占的比例依次為84.21％、7.89％、5.26％、2.63％。結(jié)合胚胎學(xué)觀察認(rèn)為，二倍體再生植株主要來(lái)源于子房壁組織，或胚珠的內(nèi)珠被組織及單倍體的自然加倍；單倍體再生植株來(lái)源于大孢子四分體；多倍體與非整倍體再生植株可能是來(lái)源于離體培養(yǎng)過(guò)程中染色體的變異重組。 通過(guò)對(duì)黃巨人子房離體培養(yǎng)胚胎學(xué)的觀察，得到了子房大小、小孢子發(fā)育時(shí)期與胚囊發(fā)育時(shí)期的關(guān)系：子房長(zhǎng)度在0.85～1.00cm之間，小孢子

7、發(fā)育在單核早期時(shí)，胚囊發(fā)育時(shí)期主要為大孢子母細(xì)胞時(shí)期；子房長(zhǎng)度在1.00～1.30cm之間，小孢子發(fā)育在單核靠邊期時(shí)，胚囊發(fā)育時(shí)期主要為四核大孢子胚囊到二核胚囊期；子房長(zhǎng)度在1.30～1.60cm之間，花粉發(fā)育在二核期時(shí)，胚囊發(fā)育時(shí)期主要為二核胚囊到四核胚囊期；子房長(zhǎng)度在1.60～1.90cm，花粉發(fā)育成熟期時(shí)，胚囊發(fā)育時(shí)期主要為四核胚囊到成熟胚囊期。試驗(yàn)觀察到胚囊在離體條件下有三種發(fā)育途徑：第一種是大孢子母細(xì)胞離體培養(yǎng)10天左右退化消