南瓜未受精子房和未受精胚珠離體培養(yǎng)研究.pdf

1、為了明確南瓜（CucurbitamoschataD.）未授粉子房和未受精胚珠誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)條件，本文以“試驗?zāi)瞎?號”為材料，以MS為基本培養(yǎng)基，主要研究了黑暗熱激預(yù)處理時間、2，4-D濃度、激素組合、碳源種類和濃度等影響南瓜離體雌核發(fā)育的因素。同時應(yīng)用石蠟切片技術(shù)觀察了南瓜胚囊的發(fā)育過程，以期為南瓜單倍體培養(yǎng)奠定重要的實踐和理論基礎(chǔ)。本研究的結(jié)果表明： 1.未受精離體雌核的誘導(dǎo)需要黑暗熱激的預(yù)處理，南瓜未受精子房培養(yǎng)的黑暗熱激

2、處理以在35℃條件下熱激處理6d為最佳，出胚數(shù)和出胚率的均值分別達(dá)到了4.8個和22％以上，而且與熱激5d、7d相比，在0.01水平上差異顯著；不同胚囊時期間的誘導(dǎo)結(jié)果分析結(jié)果顯示沒有差異，說明不同胚囊時期對于熱激誘導(dǎo)的敏感程度是相似的。未受精胚珠直接培養(yǎng)以黑暗熱激處理5d的轉(zhuǎn)綠率和胚狀體誘導(dǎo)率最高，分別達(dá)到了80％和15％以上，說明黑暗熱激5天處理能夠有效的誘導(dǎo)未受精胚珠的雌核發(fā)育，提高胚狀體誘導(dǎo)率?？偨Y(jié)兩個黑暗熱激實驗，南瓜未受精子

3、房的培養(yǎng)熱激6天能夠有效地起動離體雌核的發(fā)育，南瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)則熱激5天的誘導(dǎo)效果最佳。 2.南瓜未受精子房離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基篩選的第一步就是比較不同濃度的2，4-D對離體誘導(dǎo)的影響，結(jié)果顯示：添加了3.5mg.L-1、4.0mg.L-1、4.5mg.L-1三個濃度的基本培養(yǎng)基能有效地刺激了離體雌核的發(fā)育。胚狀體的誘導(dǎo)率在2，4-D濃度為3.5mg.L-1時達(dá)到最高，三個胚囊時期的誘導(dǎo)率都在4.5％以上，其次就是2，4-D濃

4、度在4.5mg.L-1和4.0mg.L-1的誘導(dǎo)率；并在開花前0.5天（12小時）的未受精子房最終誘導(dǎo)出了子葉胚，三個濃度分別誘導(dǎo)出了4個、2個和1個。南瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)在添加的2，4-D濃度為1.0mg.L-1和1.5mg.L-1的基本培養(yǎng)基上胚狀體誘導(dǎo)率和轉(zhuǎn)綠率較高，低濃度的和高濃度的誘導(dǎo)率都非常低。比較兩個實驗：較高的2，4-D濃度能夠有效地啟動南瓜未受精子房的雌核發(fā)育，抑制南瓜未受精胚珠胚狀體的誘導(dǎo)：而低濃度的2，4-D能有

5、效地誘導(dǎo)未受精胚珠的雌核發(fā)育。總之，基本培養(yǎng)基中添加的2，4-D應(yīng)由培養(yǎng)方式的不同而進(jìn)行選擇不同的濃度水平。 3.篩選培養(yǎng)基中最優(yōu)激素組合的試驗結(jié)果顯示：誘導(dǎo)南瓜未受精子房培養(yǎng)出胚狀體效果最好激素組合是4.0mg.L-12，4-D+0.5mg.L-1NAA+0.5mg.L-16-BA；南瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)試驗中誘導(dǎo)效果最好的激素組合是：1.0mg.L-12，4-D+0.25mg.L-1NAA+1.0mg.L-16-BA，誘導(dǎo)出

6、子葉胚總數(shù)達(dá)到了6個。相比較而言，南瓜未受精子房離體培養(yǎng)需的激素組合為高濃度的2，4-D、NAA和低濃度的6-BA；南瓜未受精胚珠直接培養(yǎng)則需低濃度的2，4-D、NAA和高濃度的6-BA。 4.蔗糖和葡萄糖都可作為南瓜未受精子房離體培養(yǎng)的碳源，誘導(dǎo)雌核發(fā)育。不同蔗糖濃度間的誘導(dǎo)效果比較，30g/L蔗糖的胚狀體誘導(dǎo)率最高；不同葡萄糖濃度間的誘導(dǎo)效果比較，40g/L葡萄糖的胚狀體誘導(dǎo)率最高；不同碳源濃度間的胚狀體誘導(dǎo)率比較，蔗糖的最

7、高胚狀體誘導(dǎo)率為8.52％，葡萄糖的最高誘導(dǎo)率為4.44％，蔗糖的誘導(dǎo)效果好于葡萄糖的誘導(dǎo)效果。南瓜未受精胚珠離體培養(yǎng)的不同蔗糖濃度胚狀體誘導(dǎo)率比較實驗，結(jié)果以25g/L的蔗糖作為碳源的誘導(dǎo)效果最好，胚狀體誘導(dǎo)率為83.33％，子葉胚7個。南瓜未受精胚珠培養(yǎng)所需的蔗糖濃度與南瓜未受精子房培養(yǎng)誘導(dǎo)雌核發(fā)育所需的蔗糖濃度，處在低濃度水平。 5.應(yīng)用石蠟切片技術(shù)觀察到南瓜胚囊發(fā)育的整個發(fā)育過程。得出了明確的結(jié)論就是：開花前3天的胚囊處