FK506對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠炎性因子表達的影響.pdf

1、背景：癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病,癲癇持續(xù)狀態(tài)(Status Epilepticus,SE)是神經(jīng)科常見的急重癥,迄今癲癇發(fā)病機制仍不十分明確。自1969年Walker提出癲癇發(fā)病的免疫假說,免疫、炎癥反應(yīng)在癲癇發(fā)病中的作用受到越來越多的關(guān)注。FK506是一種免疫抑制劑,其臨床應(yīng)用越來越廣泛。既往的研究結(jié)果證實:FK506可通過抑制神經(jīng)鈣調(diào)蛋白(calcineurin,CaN)的活性,抑制GABA.A受體(GABA-A recept

2、ors,GABA-A)脫磷酸化并抑制自由基產(chǎn)生,從而發(fā)揮抗癲癇作用。本研究建立氯化鋰——匹魯卡品大鼠SE模型,試圖探究FK506是否通過調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗癲癇作用。
　　目的：探索氯化鋰——匹魯卡品SE模型中炎性因子血管細胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecular-1,VCAM-1)、胞間黏附分子1(intercellularadhesion molecular-1,ICAM-1)、腫瘤壞死因子

3、α(TNF-α)的表達及FK506對上述炎性因子表達的影響。
　　方法：
　　1.動物分組與SE模型制作
　　將健康成年雄性Wistar大鼠168只隨機分為SE組、FK506組和對照組,SE組和FK506組均給予氯化鋰3 mol/l[L.kg)腹腔注射,20h后腹腔注射新鮮配置的匹魯卡品30mg/kg。FK506組于匹魯卡品注射前24h、lh分別腹腔注射FK506 lmg/kg。對照組給予相同體積的生理鹽水代替。

4、>　　2.行為學(xué)觀察
　　3.HE染色觀察SE后海馬神經(jīng)元的損傷情況
　　4.實時定量PCR.檢測VCAM-1、ICAM-1、TNF-α mRNA的表達
　　5.免疫組織化學(xué)染色檢測VCAM-1、ICAM-1蛋白的表達
　　6.采用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)觀察
　　SE組大鼠腹腔注射匹魯卡品后5～10min開始出現(xiàn)眨眼、節(jié)律性咀嚼動

5、作,約15min后出現(xiàn)節(jié)律性點頭動作,40min左右出現(xiàn)Ⅳ級以上發(fā)作,FK506預(yù)處理明顯延長癲癇發(fā)作潛伏期,降低發(fā)作程度。
　　2.FK506減輕SE后海馬神經(jīng)元損傷
　　HE染色結(jié)果顯示:SE組大鼠海馬神經(jīng)元失去正常結(jié)構(gòu),神經(jīng)元變性變形,胞質(zhì)染色加深,胞核固縮,神經(jīng)元數(shù)量減少,CA1、CA3區(qū)散在分布殘余細胞碎片,FK506組大鼠海馬神經(jīng)元損傷明顯減輕。
　　3.實時定量PCR檢測VCAM-1、ICAM-l、TNF

6、-amRNA的表達
　　SE組大鼠VCAM-1、ICAM-l、TNF-amRNA的表達量較對照組明顯升高,ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平在Seld出現(xiàn)高峰,SE5hTNF-a mRNA表達就達到高峰,FK506腹腔注射顯著降低炎性因子的表達。
　　4.免疫組織化學(xué)法檢測VCAM-1、ICAM-1蛋白的表達
　　免疫組化結(jié)果顯示:與對照組相比較,SE組VCAM-1、ICAM-1蛋白表達明顯升高,FK506腹腔注