FK506對大鼠脊髓損傷后軸突導(dǎo)向因子slit-2mRNA和蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察免疫抑制劑FK506對大鼠脊髓損傷后脊髓運(yùn)動(dòng)功能行為學(xué)的變化和病理改變，探討FK506對軸突導(dǎo)向因子slit-2表達(dá)的變化及意義，為臨床治療脊髓損傷提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 方法：選取健康成年SD大鼠150只，隨機(jī)平均分成三組：假手術(shù)組（n=30）、損傷組（n=60）和FK506治療組（n=60）。用Allen法建立大鼠T10脊髓損傷模型，各組動(dòng)物分別于損傷后1、3、7、14和28 d 5個(gè)時(shí)相點(diǎn)采用BBB評分法進(jìn)行脊髓

2、功能評分，后處死大鼠取損傷區(qū)脊髓組織觀察組織病理，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法（RT-PCR）和免疫組化法觀察軸突導(dǎo)向因子slit-2的變化及意義。
　　 結(jié)果：（1）BBB評分結(jié)果：假手術(shù)組脊髓神經(jīng)功能正常，BBB評分達(dá)20分；損傷組和FK506治療組均有神經(jīng)功能障礙表現(xiàn)，其中術(shù)后1、3 d評分均小于2分，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），術(shù)后7 d后治療組經(jīng)FK506治療后神經(jīng)功能較損傷組明顯改善，分值隨時(shí)間增加而變大，兩組間差異

3、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。(2) HE染色結(jié)果：假手術(shù)組見脊髓灰白質(zhì)界限清楚、神經(jīng)元及髓鞘結(jié)構(gòu)正常；而損傷組和治療組均有不同程度的變化，從局部片狀出血、周圍炎性細(xì)胞的浸潤、神經(jīng)元胞體的萎縮、膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)性增生、白質(zhì)呈網(wǎng)狀脫髓鞘及瘢痕形成，且治療組明顯輕于損傷組。（3）免疫組化法結(jié)果：slit-2在假手術(shù)組大鼠脊髓組織前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中呈少量散在表達(dá)，損傷組和治療組灰質(zhì)膠質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)和神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)可見明顯的slit-2的表達(dá)，且隨時(shí)間推

4、移而變化，術(shù)后3 d陽性細(xì)胞表達(dá)量開始增加，術(shù)后7 d達(dá)最高峰，之后呈下降趨勢，且治療組與損傷組各個(gè)時(shí)相點(diǎn)相比組間方差分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中，術(shù)后3、7 d 2個(gè)時(shí)相點(diǎn)相比組間方差分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（4）RT-PCR結(jié)果：假手術(shù)組slit-2 Mrna表達(dá)較低且穩(wěn)定，損傷組和治療組slit-2 Mrna的表達(dá)水平隨時(shí)間推移而變化，術(shù)后1d即可見slit-2 Mrna的表達(dá)，術(shù)后3d slit-2 Mrna

5、表達(dá)開始上調(diào)，于術(shù)后7 d達(dá)到峰值，之后slit-2 Mrna表達(dá)逐漸下降，各時(shí)相點(diǎn)組間方差分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中，術(shù)后3、7 d 2個(gè)時(shí)相點(diǎn)相比組間方差分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　 結(jié)論:大鼠脊髓損傷后早期，應(yīng)用低劑量FK506在一定程度上可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)及對軸突導(dǎo)向因子slit-2的表達(dá)具有明顯的促進(jìn)作用，可能是通過FK506介導(dǎo)炎性細(xì)胞的遷移及分泌的因子對再生軸突的導(dǎo)向性的正確生長發(fā)揮重要的