草莓耐寒性狀分子標(biāo)記分析.pdf

1、草莓(Fragaria ananassa Duch.)屬薔薇科草莓屬，是我國(guó)普遍栽培的兼具高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的水果。在實(shí)際栽培中，特別是北方嚴(yán)寒季節(jié)，設(shè)施結(jié)構(gòu)一般相對(duì)簡(jiǎn)單，低溫是影響草莓產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因素之一。本試驗(yàn)以合肥地區(qū)主栽草莓10個(gè)品種的葉片為試材，進(jìn)行0℃，-2℃，-4℃，-6℃，-8℃，5個(gè)溫度梯度的低溫處理，計(jì)算出10個(gè)草莓材料的半致死溫度(LT50)，然后與冷害指數(shù)作相關(guān)分析，確定各個(gè)草莓品種耐寒能力的強(qiáng)弱;運(yùn)用單因

2、素試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，對(duì)影響草莓SRAP反應(yīng)體系的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物濃度以及模板DNA濃度和退火溫度等因素進(jìn)行優(yōu)化，建立適宜草莓SRAP-PCR反應(yīng)體系;從110對(duì)引物中篩選出55對(duì)多態(tài)性好、條帶清晰穩(wěn)定的引物對(duì)，對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析、構(gòu)建聚類(lèi)樹(shù)型圖，對(duì)與草莓耐寒相關(guān)的SRAP標(biāo)記作初步研究，為草莓選育耐寒品種奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)獲得的主要結(jié)果如下:
　　(1)不同低溫脅迫下，各個(gè)草莓品種的電解質(zhì)滲透率均隨著溫度降低

3、而增大，處理溫度與電解質(zhì)滲透率之間呈負(fù)相關(guān)。依據(jù)半致死溫度的大小對(duì)10個(gè)草莓品種的耐寒性進(jìn)行排序，得出:“豐香”＞“紅顏”＞“雪妹”＞“二碼沃”＞“佐賀清香”＞“寧豐”＞“法蘭地”＞“櫪乙女”＞“京承香”＞“章姬”，且各個(gè)品種的半致死溫度依次為:-5.32℃、-4.74℃、-4.24℃、-3.89℃、-3.88℃、-3.09℃、-2.97℃、-2.43℃、-2.19℃、-1.70℃。
　　(2)冷害指數(shù)統(tǒng)計(jì)得出，10個(gè)品種的冷害指

4、數(shù)在50％～90％之間，與半致死溫度作相關(guān)分析，得出相關(guān)系數(shù)為0.735，達(dá)顯著水平。
　　(3)用改良的CTAB法成功提取了高質(zhì)量的草莓基因組DNA，其OD260/OD280值基本在1.7-2.0之間，瓊脂糖電泳檢測(cè)結(jié)果也表明提取的DNA純度較好，無(wú)明顯蛋白質(zhì)等污染。
　　(4)對(duì)草莓SRAP-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了適宜草莓SRAP-PCR反應(yīng)體系:20μl的反應(yīng)體系中含10×PCR buffer2μl， Mg2+

5、2.0mmol/L，dNTPs0.3mmol/L，正反向引物各為0.6μmol/L，TaqDNA聚合酶1.0U，模板DNA為100ng。
　　(5)從110對(duì)SRAP引物篩選出條帶豐富清晰、多態(tài)性較好的引物對(duì)共55對(duì)，占總引物對(duì)的50％。共擴(kuò)增出311條多態(tài)性條帶，平均多態(tài)率為73.43％。多態(tài)性信息含量（PIC值）在0.9001～0.2688之間，平均PIC值為0.6993。聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，10個(gè)草莓品種可分為3個(gè)大類(lèi)，其中耐