番茄種子純度檢測(cè)與品種鑒定的分子標(biāo)記分析.pdf

1、番茄(Lycopersicon esculentum L.)是世界上重要的茄科蔬菜作物之一，其種植面積大，市場(chǎng)上種類繁多，極其容易造成品種的混雜；同時(shí)番茄具有較強(qiáng)的雜種優(yōu)勢(shì)，目前市場(chǎng)上廣泛利用的均為雜交一代的種子，由于雜交種多是利用人工制種，質(zhì)量難以控制，時(shí)常發(fā)生偽劣種子上市，極易給生產(chǎn)帶來重大損失。因此準(zhǔn)確、迅速、簡(jiǎn)便地鑒定番茄品種與檢測(cè)遺傳純度是當(dāng)前蔬菜生產(chǎn)和種子工作的重要內(nèi)容。 本研究對(duì)影響PCR反應(yīng)的主要因子—模板DNA

2、、引物、dNTPs和Mg<'2+>濃度進(jìn)行分析，建立起了適合于番茄基因組DNA的RAPD與SRAP-PCR反應(yīng)體系。RAPD反應(yīng)體系(18μl)為隨機(jī)引物0.4-0.6μmol·L<'-1>，dNTPs 0.15～0.2mmol·L<'-1>，Mg<'2+> 2.0mmol·L<'-1>，模板DNA 36～360ng,TaqDNA聚合酶0.8U；SRAP反應(yīng)體系(10μL)為引物0.25μmol·L<'-1>，dNTPs 0.05～0.

3、2 mmol·L<'-1>，Mg<'2+>1.5～3.0 mmol·L<'-1>，模板DNA為10～20 ng，TaqDNA聚合酶0.5U。同時(shí)對(duì)PCR反應(yīng)擴(kuò)增程序中的復(fù)性溫度進(jìn)行了梯度PCR，試驗(yàn)表明，37℃的退火溫度適合于番茄RAPD分析，而SRAP中退火溫度在引物Tm值的一定范圍內(nèi)差異不明顯。 利用RAPD、ISSR、SSR三種分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)‘合作903’、‘合作906’、‘蘇粉8號(hào)’和‘蘇粉9號(hào)’4個(gè)番茄雜交種進(jìn)了種子遺

4、傳純度的鑒定。共選用321個(gè)引物(218RAPD，54 ISSR，和49 SSR)，進(jìn)行4個(gè)番茄雜交種及其親本特異標(biāo)記的篩選。利用所得到能同時(shí)獲得父母本特異性標(biāo)記的共顯性引物對(duì)4個(gè)雜交種的210個(gè)單株分別進(jìn)行了純度鑒定；在‘合作906’的RAPD分析中也分別運(yùn)用了產(chǎn)生一偏父與偏母型標(biāo)記的引物組合對(duì)其進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明分子鑒定與田間鑒定純度有較好的一致性?？梢杂梅肿訕?biāo)記技術(shù)來代替田間純度鑒定，克服其周期長、勞動(dòng)力大、易受環(huán)境條件影響準(zhǔn)確

5、性差等缺點(diǎn)，從而準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、迅速地進(jìn)行番茄種子純度鑒定。 利用基因組DNA的RAPD、ISSR與SRAP分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)32個(gè)番茄主要品種進(jìn)行了指紋圖譜的分子標(biāo)記分析，分別構(gòu)建了品種的三種分子標(biāo)記數(shù)字化核酸指紋。結(jié)果表明各番茄品種遺傳多樣性在分子水平上差異不大，利用任何一個(gè)單一引物都不能將所有供試品種區(qū)分開，最高鑒別效率的引物RP408與IS35也只能區(qū)別其中的8個(gè)品種；同時(shí)聚類分析表明，分子標(biāo)記技術(shù)在一定程度上能夠揭示品種之間