藥物及生物大分子的共振瑞利散射和共振非線性散射法研究與應(yīng)用.pdf

1、共振瑞利散射（RRS）和共振非線性散射（RNLS）作為一類新的光散射分析技術(shù)興起并發(fā)展于20世紀(jì)90年代。RRS分析技術(shù)是1993年由Pastemack等在普通的熒光光度計(jì)上所建立的，并率先將RRS作為一種分析技術(shù)用于核酸的研究和檢測(cè)；1995年國(guó)內(nèi)劉紹璞教授等在研究離子締合物RRS的過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)不同波長(zhǎng)的平行單色光通過某些溶液時(shí)，在入射光波長(zhǎng)的2倍和1/2處也能產(chǎn)生強(qiáng)烈的光散射，首次將它們作為一種光譜分析技術(shù)進(jìn)行研究，并認(rèn)為這是由于

2、RRS而產(chǎn)生了RNLS，基于此建立了新的痕量分析方法。由于它們靈敏度高，且操作簡(jiǎn)便快捷而引起了人們的關(guān)注，并已成為化學(xué)研究中的新的手段，在當(dāng)前分析化學(xué)研究中具有廣泛應(yīng)用前景。
　　 本文首次提出以茜素紅及其稀土配合物為光散射探針，研究了其與四環(huán)素類藥物及生物大分子牛血清白蛋白相互作用的RRS和RNLS光譜，發(fā)現(xiàn)稀土離子的加入，使得體系的RRS及RNLS同步增強(qiáng)，據(jù)此建立了新的用于痕量藥物及生物大分子的分析檢測(cè)的RRS法和RNLS

3、法，該方法不僅靈敏度高，且分析的線性范圍寬；同時(shí)以RRS法研究了甲基藍(lán)（MB）與血紅蛋白（Hb）的聚集作用，將此法用于Hb的痕量分析具有很高的靈敏度。據(jù)此，本論文分以下兩部分進(jìn)行研究：
　　 第一部分茜素紅-稀土離子配合物為光散射探針的共振瑞利散射和共振非線性散射法測(cè)定四環(huán)素類藥物
　　 （1）在pH5.75的HAc-NaAc緩沖液中，茜素紅（ARS）-La與四環(huán)素（TC）形成三元配合物，導(dǎo)致體系的共振瑞利散射（RRS）

4、、二級(jí)散射（SOS）和倍頻散射（FDS）均增強(qiáng)，光譜最大散射波長(zhǎng)分別位于312nm、580nm和290nm，對(duì)于RRS在0.004-0.444μg/mL、SOS在0.008-0.444μg/mL和FDS在0.008-0.444μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，TC的檢出限分別為2.95ng/mL（RRS法）、2.47ng/mL（SOS法）和2.27ng/mL（FDS法），據(jù)此建立了靈敏的測(cè)定四環(huán)素的RRS和RNLS法，檢出限達(dá)到納克級(jí)。

5、并以SOS法考察了ARS-La-TC體系的反應(yīng)條件、影響因素等，以標(biāo)準(zhǔn)加入法對(duì)生物樣品進(jìn)行分析，結(jié)果滿意。
　　 （2）在pH4.4的HAc-NaAc緩沖液中，茜素紅（ARS）-Eu與米諾環(huán)素（MC）形成三元配合物，導(dǎo)致共振瑞利散射（RRS）增強(qiáng)，首次以染料-稀土配合物為光散射探針，建立了一種測(cè)定米諾環(huán)素的RRS分析方法。在λ=370nm處，米諾環(huán)素濃度在0.073～5.493μg/mL范圍內(nèi)與體系RRS強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，檢

6、出限為0.021μg/mL。此方法靈敏度高，簡(jiǎn)單、快速，具有良好的選擇性和重復(fù)性，對(duì)尿樣進(jìn)行加標(biāo)回收及用于片劑、膠囊中米諾環(huán)素的測(cè)定，結(jié)果滿意。
　　 第二部分染料及其稀土離子配合物為光散射探針的共振瑞利散射和共振非線性散射法在生物大分子測(cè)定中的研究及應(yīng)用
　　 （1）在pH4.5的HAc-NaAc緩沖液中，茜素紅（ARS）-La與牛血清白蛋白（BSA）形成三元離子締合物，導(dǎo)致共振瑞利散射（RRS）、二級(jí)散射（SOS）和

7、倍頻散射（FDS）同步顯著增強(qiáng)，光譜最大散射波長(zhǎng)分別位于373nm、620nm和310nm，對(duì)于RRS在0.034～13.4μg/mL、SOS在0.201-13.40μg/mL和FDS在0.201-10.05μg/mL范內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，對(duì)于BSA的檢出限分別為0.010μg/mL（RRS法）、0.052μg/mL（SOS法）和0.089μg/mL（FDS法），首次以染料-稀土配合物為光散射探針，建立了靈敏的測(cè)定BSA的RRS和RNL

8、S分析法。以RRS法考察TARS-La與BSA三元離子締合物的適宜條件、影響因素等，此方法可用于生物樣品中蛋白含量的測(cè)定，并對(duì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收，結(jié)果滿意。
　　 （2）以甲基藍(lán)（MB）為光散射探針，應(yīng)用RRS法研究了與血紅蛋白（Hb）相互作用的二元體系的光散射性質(zhì)。在弱酸性條件下，MB可以通過靜電和疏水作用聚集到Hb上并形成離子締合物，不僅使吸收光譜發(fā)生變化，而且使得RRS增強(qiáng)。據(jù)此發(fā)展了一種新的測(cè)定Hb的RRS便捷方法，其線性