半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒聯(lián)合交變磁場(chǎng)對(duì)肝癌的影響研究.pdf

1、第一章鐵磁流體聯(lián)合交變磁場(chǎng)對(duì)人肝癌細(xì)胞的影響 目的：探討一定的交變磁場(chǎng)不同濃度Fe<,3>O<,4>磁流體熱療對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的影響。 方法：在肝細(xì)胞的培養(yǎng)液中分別加入不同濃度的Fe<,3>O<,4>磁流體，暴露在交變磁場(chǎng)中30min后，采用MTT法、細(xì)胞計(jì)數(shù)、光鏡、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀等觀察經(jīng)過上述藥物處理后，肝癌細(xì)胞活細(xì)胞數(shù)的光密度值、殺傷率、生長曲線、細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞周期及凋亡情況。 結(jié)果：隨著磁

2、流體中Fe<,3>O<,4>納米粒濃度的增加，①細(xì)胞培養(yǎng)液的溫度分別上升到38.9℃～47.2℃；Fe<,3>O<,4>濃度≥4.5mg/ml時(shí)，溫度>41℃；②細(xì)胞增殖抑制增強(qiáng)，肝癌細(xì)胞活細(xì)胞數(shù)的光密度值下降，殺傷率增加；當(dāng)Fe<,3>O<,4>濃度≥4.5mg/ml時(shí)，CI≥50％，CI最高達(dá)85.91％，呈明顯的量效關(guān)系(P<0.001)；③細(xì)胞收縮、變圓，細(xì)胞稀疏，胞漿中可見空泡；細(xì)胞核染色質(zhì)凝聚、濃縮，有的成半月形或梅花瓣?duì)罡?/p>

3、變，尤以Fe<,3>O<,4>濃度≥4.5mg/ml時(shí)變化明顯；④細(xì)胞周期停滯于S期，S期細(xì)胞增加，凋亡率增加；Fe<,3>O<,4>濃度從4.5mg/ml增加到6.0mg/ml時(shí)，凋亡率分別由27.06％增加到66.05％；Fe<,3>O<,4>濃度為3.0mg/ml時(shí)，溫度為39.8℃<40℃，凋亡率為14.22％(P<0.001)。 結(jié)論：交變磁場(chǎng)作用下，隨Fe<,3>O<,4>濃度增加，溫度升高，磁流體對(duì)人肝癌細(xì)胞Hep

4、G2毒性增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡增加；磁流體中Fe<,3>O<,4>濃度與其成明顯的量效依賴關(guān)系。 第二章半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒聯(lián)合交變磁場(chǎng)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2和人肝細(xì)胞L-02的體外影響 目的：探討半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒聯(lián)合交變磁場(chǎng)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和人肝細(xì)胞L-02的體外影響，并比較其差異。 方法：將體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞HepG2及人肝細(xì)胞L-02，分別隨機(jī)分成6組：A1、A2組，即未加藥物的對(duì)照組

5、(RPMI 1640+AMF)，B1、B2組，即游離阿霉素+交變磁場(chǎng)(ADM+AMF)，C1、C2組，即半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒組(Gal-MADM-NP)，D1、D2組，即阿霉素磁性納米粒+交變磁場(chǎng)(ADM-NP+AMF)、E1、E2組，即半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒+交變磁場(chǎng)(Gal-MADM-NP+AMF)。除C1、C2組，其它各組分別暴露在頻率為100kHz，磁場(chǎng)強(qiáng)度為15kA/m的磁場(chǎng)中，作用30min。采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法

6、、MTT法、Hoechst熒光染色、瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞儀等方法觀察經(jīng)藥物及磁場(chǎng)處理后的HepG2細(xì)胞和L-02細(xì)胞生長曲線、活細(xì)胞的光密度值及殺傷率、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的變化，并比較其差異。 結(jié)果：①試驗(yàn)組，HepG2和L-02細(xì)胞增殖均有不同程度的抑制，細(xì)胞殺傷率，隨阿霉素濃度的增加而增強(qiáng)；E1、E2組對(duì)兩種細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)；②試驗(yàn)組均出現(xiàn)典型的DNA梯形條帶，尤以E1、E2組，DNA梯形帶更明顯；③E1、E2組，H

7、epG2細(xì)胞和L-02細(xì)胞凋亡率分別達(dá)40.12±2.28％、45.3±2.48％；均比B1、B2組高出約4倍；S期細(xì)胞分別為39.53±3.67％、53.46±4.73％，凋亡率和S期細(xì)胞均明顯高于其它組(P<0.001)；④各試驗(yàn)組，L-02細(xì)胞的細(xì)胞增殖抑制、細(xì)胞殺傷率、細(xì)胞凋亡率明顯高于HepG2細(xì)胞，L-02細(xì)胞形態(tài)改變比HepG2細(xì)胞更明顯(P<0.05)。 結(jié)論：磁場(chǎng)下，Gal-MADM-NP在體外對(duì)人肝癌細(xì)胞He

8、pG2和人肝細(xì)胞L-02有比ADM和Gal-MADM-NP未加磁場(chǎng)的單純化療及ADM-NP+AMF熱化療有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性及促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用；在體外對(duì)人肝細(xì)胞L-02比對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2有更強(qiáng)的殺傷力。 第三章半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒聯(lián)合交變磁場(chǎng)對(duì)兔VX2肝癌的影響研究 目的：探討半乳糖化白蛋白磁性阿霉素納米粒對(duì)兔VX2肝癌的磁介導(dǎo)熱療作用。 方法：將兔VX2瘤塊植入兔肝左包膜下，制備移植性兔VX2肝癌

9、模型。成模后動(dòng)物隨機(jī)分成6組：A組，對(duì)照組，即生理鹽水+交變磁場(chǎng)(NP+AMF)組；B組，游離阿霉素+交變磁場(chǎng)(ADM+LMF)組：C組，半乳糖磁性阿霉素納米粒組(Gal-MADM-NP)；D組，F(xiàn)e<,3>O<,4>納米粒(NP+AMF)+交變磁場(chǎng)組；E組，阿霉素磁性納米粒+交變磁場(chǎng)(ADM-NP+AMF)組；F組，半乳糖化磁性阿霉素納米粒+交變磁場(chǎng)組(Gal-MADM-NP+AMF)。各組經(jīng)肝動(dòng)脈插管灌注藥物，用量按2mg/kg阿霉

10、素(試驗(yàn)兔體重2.5～3kg/只)計(jì)算，約相當(dāng)于50mg/kg的Gal-MADM-NP。注藥后，除C組外，其它各組均置交變磁場(chǎng)中作用30min，期間光纖溫度測(cè)量儀監(jiān)測(cè)癌中心區(qū)、癌邊緣區(qū)、正常肝組織和直腸的溫度變化；治療后14天的肝癌體積、肝癌的生長率、肝癌及正常肝組織的病理改變。 結(jié)果：①D、E、F組癌中心區(qū)(42.4℃、42.6℃、42.7℃)和邊緣區(qū)溫度(40.3℃、40.6℃、40.7℃)顯著高于正常肝組織(36.7℃、3

11、6.8℃、36.9℃)和直腸(36.4℃、36.4℃、36.2℃)(P<0.001)；對(duì)照組、ADM組及Gal-MADM-NP組各部位的溫度無明顯升高。②治療后14d，F(xiàn)組腫瘤體積明顯縮小，腫瘤生長率為-15％；肝癌細(xì)胞可見大面積壞死，平均在(70％以上)，癌灶及癌邊緣可見栓塞的鐵磁微粒，而右肝未見鐵磁微粒的沉積；其它各組體積增大3.5～13倍，腫瘤生長率顯著增加(127～568％)，肝癌細(xì)胞中至輕度壞死(0～70％)。 結(jié)論：