共載阿霉素和依克立達的PLGA-TPGS納米粒抗肝癌細胞和肝癌干細胞的作用研究.pdf

1、肝癌是最常見的腫瘤之一，嚴重威脅人類的健康。目前，對于肝癌的治療依舊以傳統(tǒng)的治療手段為主，但治療效果不佳。肝癌干細胞(Liver Cancer Stem Cells，LCSCs)是腫瘤細胞中正常干細胞具有類似功能的一種細胞亞群，具有自我更新、無限增殖的能力，被認為是腫瘤易復發(fā)的主要原因。因此，增強藥物對肝癌干細胞的靶向殺傷能力對提高腫瘤的治療效果具有重要的作用。
　　傳統(tǒng)的抗腫瘤藥物難以抑制肝癌干細胞，這是由于肝癌干細胞具有多藥耐

2、藥的特點，其產(chǎn)生的主要原因是過表達ABC轉(zhuǎn)蛋白，能夠?qū)⑦M入細胞內(nèi)的藥物排出，降低藥物作用。依克立達(Elacridar，ELC)是第三代P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)抑制劑，能夠抑制ABC轉(zhuǎn)運蛋白ABCB1和ABCG2。有研究表明，ELC與化療藥物聯(lián)用能夠提高腫瘤細胞對藥物的敏感性，增強藥物的抑制作用。本課題構建了一種共載遞藥系統(tǒng)，以PLGA為載體，包載抗腫瘤藥物阿霉素(DOX)和ELC，以期共同殺傷肝癌細胞和肝癌

3、干細胞。
　　第一部分，培養(yǎng)肝癌HepG2細胞系，并通過無血清懸浮培養(yǎng)獲得HepG2微球體（HepG2-TS）。細胞毒性實驗結果顯示，游離DOX對HepG2細胞系和HepG2-TS的IC50值分別為0.230±0.0221μM和0.477±0.0514μM;游離ELC對HepG2細胞系和HepG2-TS的IC50值分別為9.266±2.609μM和13.740±4.271μM，結果表明HepG2細胞系對DOX更敏感，ELC細胞毒性

4、較低;通過考察DOX和ELC在不同比例下對HepG2細胞系和HepG2-TS的殺傷，確定DOX和ELC聯(lián)用對HepG2細胞系和HepG2-TS最佳協(xié)同比例為1∶1（mol/mol）。
　　第二部分，分別建立了DOX和ELC的體外測定方法。實驗結果顯示:在1～40μg/mL濃度范圍內(nèi)，DOX的線性回歸方程為A=0.021 C+0.002，R2=0.999，線性良好，特異性高，日內(nèi)日間精密度均小于2％，提取回收率均大于98％;在0.5

5、～100μg/mL濃度范圍內(nèi)，ELC線性回歸方程為A=120742.4626C+1974.5704，R2=1.0000，線性良好，特異性高，日內(nèi)日間精密度均大于98％，提取回收率均小于2％，符合實驗要求。
　　第三部分，以PLGA為載體，TPGS為表面活性劑，按照納米粒沉淀法分別制備了空白納米粒(NB)、載DOX納米粒(ND）、載ELC納米粒(NE)和共載DOX和ELC納米粒(NDE)。處方優(yōu)化后，獲得的共載納米粒的粒徑50nm左

6、右，分布均勻，呈球形，Zeta電位在-15.6mV附進，兩藥的包封率和載藥量較高且兩藥摩爾比約為1∶1，達到協(xié)同比例;納米粒在4℃條件下保存較為穩(wěn)定;體外釋放實驗表明NDE具有較好的緩釋效果，在pH5.5條件下，藥物釋放更快，累積釋放率更高。
　　第四部分，考察納米粒體外抗HepG2細胞系和HepG2-TS的活性。以DOX為熒光探針，考察細胞對納米粒的攝取情況，實驗結果表明納米粒能促進HepG2細胞和HepG2-TS對藥物的攝取，

7、提高藥物的蓄積;分別利用細胞毒性實驗、平板克隆實驗以及微球體形成率實驗考察納米粒體外抗腫瘤活性，結果表明兩藥聯(lián)用能提高藥物對HepG2細胞和HepG2-TS的細胞毒性，抑制細胞增殖和抑制微球體形成，納米粒能夠增強藥物的抗腫瘤作用，其中ND和NE聯(lián)用組與NDE組對HepG2細胞和HepG2-TS的抑制效果最強。
　　第五部分，考察納米粒體內(nèi)抗肝癌活性作用。以DiR為熒光探針，考察納米粒在荷瘤裸鼠的體內(nèi)分布，實驗結果表明，納米粒組對腫

8、瘤具有靶向性，能夠較快的達到腫瘤部位，在腫瘤內(nèi)蓄積較多;藥代動力學實驗結果表明納米粒能夠延長藥物的半衰期，提高藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，顯著提高藥時曲線下面積;體內(nèi)藥效學實驗結果表明空白納米粒組系統(tǒng)毒性較小，游離DOX+ELC組雖然也具有較好的抗肝癌效果，但系統(tǒng)毒性較大，不利于聯(lián)合給藥，NDE組在體內(nèi)的抗肝癌效果最強，腫瘤抑制率達到89.99±1.66％。
　　綜述所述，本課題構建的共載納米遞藥系統(tǒng)-共載阿霉素和Elacridar的P