活性調(diào)節(jié)細胞骨架蛋白siRNA慢病毒表達載體對杏仁核點燃大鼠學習記憶的影響.pdf

1、目的:研究慢病毒介導的活性調(diào)節(jié)細胞骨架蛋白(Arc)siRNA對杏仁核電點燃大鼠學習記憶功能的影響,探討Arc在癲癇伴發(fā)認知功能障礙中的作用。
　　方法:雄性SD大鼠60只,麻醉后左側(cè)杏仁核基底外側(cè)核(前囟后2.8mm;左側(cè)旁開4.9mm;硬膜下8.6mm)植入刺激電極,右側(cè)背側(cè)海馬(前囟后3.6mm;右側(cè)旁開2.2mm;硬膜下2.5mm)植入注射套管。電刺激大鼠左側(cè)杏仁核基底外側(cè)核構(gòu)建點燃模型,點燃成功后,隨機分為三組:載體注射

2、組(n=20)、空載體注射組(n=20)、單純點燃組(n=20)。將成功構(gòu)建的ArcsiRNA慢病毒表達載體、慢病毒空載體以及生理鹽水分別注射到上述三組大鼠的右側(cè)背側(cè)海馬。兩周后行避暗實驗觀察各組大鼠第一次進入暗箱的潛伏期和明暗箱之間的穿梭次數(shù),以檢測大鼠的記憶保持能力;Morris水迷宮實驗觀察各組大鼠的逃避潛伏期以及平臺象限穿越次數(shù)和留滯時間,以檢測大鼠的空間學習和記憶能力。行為學實驗結(jié)束后第二天電刺激大鼠之后,提取右側(cè)慢病毒注射部

3、位的海馬組織,采用熒光定量PCR、Western-blot技術(shù)檢測各組大鼠海馬ArcmRNA以及蛋白的表達情況。實驗數(shù)據(jù)均用sx±表示,采用完全隨機設計的方差分析,兩兩比較采用Dunnett-t檢驗,數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.避暗實驗:載體注射組、空載體注射組以及單純點燃組大鼠穿梭次數(shù)分別為:11.50±1.080、3.70±1.494、3.80±1.317

4、,進入暗箱的潛伏期分別為:15.40±8.058、94.00±10.934、99.50±10.628。三組比較差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。載體注射組與其它兩組比較,穿梭次數(shù)增加、進入暗箱的潛伏期縮短,差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。
　　2.morris水迷宮:在五天的定位航行實驗中,三組大鼠的逃避潛伏期第1、2d比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),第3、4、5d三組比較差異均有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05),載體注射

5、組與其它兩組比較,逃避潛伏期時間長,差異均有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。單純點燃組與空載體注射組比較,差異無統(tǒng)計學顯著性(P>0.05)。隨著實驗天數(shù)的增加,各組逃避潛伏期都呈現(xiàn)出逐漸縮短的趨勢,但是載體注射組與其它兩組相比,縮短的趨勢不明顯(P>0.05)。在空間搜索實驗中,三組大鼠平臺象限的穿梭次數(shù)和留滯時間比較,差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05),載體注射組與其它兩組比較,平臺象限穿梭次數(shù)以及留滯時間明顯減少,差異有統(tǒng)計學顯著性

6、(P<0.05)。
　　3.熒光定量PCR:載體注射組、空載體注射組以及單純點燃組大鼠背側(cè)海馬ArcmRNA相對表達量分別為:5.80±0.06、13.55±0.42、15.82±0.51,三組比較差異有統(tǒng)計學顯著性(P<0.05)。載體注射組與其它兩組比較,ArcmRNA表達明顯下降(P<0.05)。
　　4.Western-blot:載體注射組、空載體注射組以及單純點燃組大鼠背側(cè)海馬Arc蛋白相對含量分別為:0.108±