活性調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白siRNA慢病毒表達(dá)載體對(duì)杏仁核點(diǎn)燃大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響.pdf

1、目的:研究慢病毒介導(dǎo)的活性調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白(Arc)siRNA對(duì)杏仁核電點(diǎn)燃大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,探討Arc在癲癇伴發(fā)認(rèn)知功能障礙中的作用。
　　方法:雄性SD大鼠60只,麻醉后左側(cè)杏仁核基底外側(cè)核(前囟后2.8mm;左側(cè)旁開4.9mm;硬膜下8.6mm)植入刺激電極,右側(cè)背側(cè)海馬(前囟后3.6mm;右側(cè)旁開2.2mm;硬膜下2.5mm)植入注射套管。電刺激大鼠左側(cè)杏仁核基底外側(cè)核構(gòu)建點(diǎn)燃模型,點(diǎn)燃成功后,隨機(jī)分為三組:載體注射

2、組(n=20)、空載體注射組(n=20)、單純點(diǎn)燃組(n=20)。將成功構(gòu)建的ArcsiRNA慢病毒表達(dá)載體、慢病毒空載體以及生理鹽水分別注射到上述三組大鼠的右側(cè)背側(cè)海馬。兩周后行避暗實(shí)驗(yàn)觀察各組大鼠第一次進(jìn)入暗箱的潛伏期和明暗箱之間的穿梭次數(shù),以檢測(cè)大鼠的記憶保持能力;Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察各組大鼠的逃避潛伏期以及平臺(tái)象限穿越次數(shù)和留滯時(shí)間,以檢測(cè)大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后第二天電刺激大鼠之后,提取右側(cè)慢病毒注射部

3、位的海馬組織,采用熒光定量PCR、Western-blot技術(shù)檢測(cè)各組大鼠海馬ArcmRNA以及蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用sx±表示,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析,兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn),數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.避暗實(shí)驗(yàn):載體注射組、空載體注射組以及單純點(diǎn)燃組大鼠穿梭次數(shù)分別為:11.50±1.080、3.70±1.494、3.80±1.317

4、,進(jìn)入暗箱的潛伏期分別為:15.40±8.058、94.00±10.934、99.50±10.628。三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。載體注射組與其它兩組比較,穿梭次數(shù)增加、進(jìn)入暗箱的潛伏期縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。
　　2.morris水迷宮:在五天的定位航行實(shí)驗(yàn)中,三組大鼠的逃避潛伏期第1、2d比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),第3、4、5d三組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),載體注射

5、組與其它兩組比較,逃避潛伏期時(shí)間長(zhǎng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。單純點(diǎn)燃組與空載體注射組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P>0.05)。隨著實(shí)驗(yàn)天數(shù)的增加,各組逃避潛伏期都呈現(xiàn)出逐漸縮短的趨勢(shì),但是載體注射組與其它兩組相比,縮短的趨勢(shì)不明顯(P>0.05)。在空間搜索實(shí)驗(yàn)中,三組大鼠平臺(tái)象限的穿梭次數(shù)和留滯時(shí)間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05),載體注射組與其它兩組比較,平臺(tái)象限穿梭次數(shù)以及留滯時(shí)間明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性

6、(P<0.05)。
　　3.熒光定量PCR:載體注射組、空載體注射組以及單純點(diǎn)燃組大鼠背側(cè)海馬ArcmRNA相對(duì)表達(dá)量分別為:5.80±0.06、13.55±0.42、15.82±0.51,三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。載體注射組與其它兩組比較,ArcmRNA表達(dá)明顯下降(P<0.05)。
　　4.Western-blot:載體注射組、空載體注射組以及單純點(diǎn)燃組大鼠背側(cè)海馬Arc蛋白相對(duì)含量分別為:0.108±