抑癌核酸元件C-EBPβ3′UTR對細胞骨架蛋白的表達和細胞周期的影響.pdf

1、C/EBPβ(CCAAT/enhancer-binding protein β)，又稱NF-IL6，是一個與細胞增殖和分化密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子。我們組曾發(fā)現(xiàn)，C/EBPβ mRNA的3′UTR 轉(zhuǎn)染人肝癌惡性細胞——SMMC7721時，能引起該細胞的惡性度降低，即惡性表型逆轉(zhuǎn)，這一發(fā)現(xiàn)后來得到了美國科學(xué)家的證實。在后來的研究中我們發(fā)現(xiàn)C/EBPβ 3’UTR 能與波形蛋白(Vimentin)、細胞角蛋白8(Cytokcratin 8，CK

2、8)和細胞角蛋白18(Cytokeratin 18，CK18) 發(fā)生專一相互作用。這里我們探討了C/EBPβ 3’UTR 與細胞表型的關(guān)系以及對細胞周期的影響。 我們以肝癌細胞系SMMC7721細胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了C/EBPB 3’UTR回復(fù)細胞系C11細胞為研究對象，利用免疫熒光染色、蛋白質(zhì)印跡免疫分析和流式細胞儀檢測的方法，初步探討了CK18、CK8、Vimentin在兩種細胞株的分布及表達特征。通過激光共焦顯微鏡觀察免疫熒光染

3、色后的細胞，我們發(fā)現(xiàn)CK18均勻地分布在7721細胞的細胞質(zhì)中；而在C11細胞中，CK18主要集中在細胞質(zhì)的核周。CK8在7721和C11細胞中的分布無明顯差異，它們都分布在細胞質(zhì)中，且在核周的表達較強。Vimentin在7721細胞中，相對均勻地分布在細胞質(zhì)；而在Cll細胞中則集中在某個特定的部位。為了更進一步觀察3’UTR對這三種蛋白質(zhì)分布的影響，我們將 C/EBPβ 3’UTR 連入到綠色熒光蛋白的3’端構(gòu)建出 pEGFP-C<,

4、2>-終/280，并用該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染7721細胞。我們選取不同的時間點(12h、24h、36h、48h、72h)，用激光共焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染了3’UTR后，上述三種蛋白的分布隨時間的變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后這三種蛋白的分布表達隨時間無明顯變化。但是蛋白質(zhì)印跡免疫分析表明，與沒有轉(zhuǎn)染3’UTR的7721細胞相比，在轉(zhuǎn)染24h后，轉(zhuǎn)染了 pEGFP-C<,2>-終/280的 7721 細胞中CK18的表達量下降，CK8的表達沒有明顯變化，而Vim