庫(kù)爾勒香梨SCoT反應(yīng)體系優(yōu)化及優(yōu)良營(yíng)養(yǎng)系鑒定.pdf

1、庫(kù)爾勒香梨原產(chǎn)庫(kù)爾勒地區(qū)，栽培時(shí)間久遠(yuǎn)，具有品質(zhì)優(yōu)良、皮薄肉脆、汁豐味甜、香味濃郁、極耐儲(chǔ)藏的優(yōu)點(diǎn)，庫(kù)爾勒香梨的品質(zhì)優(yōu)良，近年來(lái)庫(kù)爾勒香梨已經(jīng)遠(yuǎn)銷(xiāo)國(guó)內(nèi)外，成為庫(kù)爾勒地區(qū)主栽的經(jīng)濟(jì)作物之一。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展，運(yùn)用分子技術(shù)輔助果樹(shù)新品種的選育和鑒定已經(jīng)成為一種趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)以庫(kù)爾勒香梨和2006-2009年期間從農(nóng)二師各大優(yōu)良庫(kù)爾勒香梨種植園選擇的脫萼型、豐產(chǎn)型、大果型優(yōu)良營(yíng)養(yǎng)系為試材，運(yùn)用SCoT分子標(biāo)記方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行擴(kuò)增，并克

2、隆測(cè)序，找到優(yōu)良營(yíng)養(yǎng)系與對(duì)照材料之間的堿基差異，并對(duì)優(yōu)良營(yíng)養(yǎng)系進(jìn)行鑒定，為庫(kù)爾勒香梨的品種鑒定研究提供技術(shù)支持。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴試劑盒法和改良SDS法適合提取庫(kù)爾勒香梨基因組DNA，而試劑盒法提取的庫(kù)爾勒香梨基因組DNA最適合SCoT分析。⑵SCoT-PCR擴(kuò)增程序和反應(yīng)體系如下：反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性4 min；94℃45 s，50℃30 s，72℃1 min，循環(huán)30次；72℃8 min；16℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用1.

3、2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。反應(yīng)體系：20μL體系中包含10×buffer with Mg2+2.5μL，dNTPs1.6mmol·L-1，引物10μmol·L-1，Taq酶1.5U，DNA模板25ng。⑶從篩選出的20個(gè)引物中隨機(jī)選擇2條引物對(duì)24份材料擴(kuò)增，用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx對(duì)測(cè)序結(jié)果分析，結(jié)果表明擴(kuò)增獲得的序列與沙梨、金冠蘋(píng)果、草莓、碧桃、釀酒葡萄等相關(guān)基因同源性