應(yīng)用差異顯示技術(shù)研究實驗性腦膿腫的早期相關(guān)基因.pdf

1、目的研究腦組織對金黃色葡萄球菌的免疫反應(yīng)及腦膿腫形成和發(fā)展過程中所涉及的分子機制.方法采用金黃色葡萄球菌大鼠右大腦半球皮層下接種的方法建立實驗性腦膿腫模型;通過改進了的mRNA差異顯示PCR技術(shù)對實驗性腦膿腫早期的組織標(biāo)本進行了檢測;對差異表達基因的擴增片段進行克隆、測序、鑒定,再與Genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進行同源性匹配,確定腦膿腫相關(guān)基因或發(fā)現(xiàn)新基因,對新基因進行EST序列的注冊;通過生物信息學(xué)技術(shù)對腦膿腫相關(guān)基因進行染色體定

2、位,對部分腦膿腫相關(guān)EST片段進行電子延伸并用RT-PCR加以證實,并作開放閱讀框架(ORF)及翻譯蛋白功能的預(yù)測分析;應(yīng)用5′末端快速擴增法(5′RACE)對1個腦膿腫相關(guān)EST片段進行擴增序列全長的嘗試.結(jié)論采用金黃色葡萄球菌大鼠右大腦半球皮層下接種的方法建立的實驗性腦膿腫模型完全符合腦膿腫的病理變化過程;腦組織對金葡菌的免疫反應(yīng)及腦膿腫形成和發(fā)展過程中涉及復(fù)雜的分子機制,G蛋白信號系統(tǒng)的激活,特別是Gα亞基效應(yīng)因子信號傳導(dǎo)通路的激