2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分肝細(xì)胞性肝癌患者HGF/c-Met表達(dá)特征評價
  目的:檢測原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血清肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平及HCC組織c-Met蛋白表達(dá)水平。
  方法:通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫ELISA方法檢測血清標(biāo)本中HGF水平,通過免疫組織化學(xué)方法檢測肝臟病理標(biāo)本c-Met蛋白染色強(qiáng)度。對肝癌組與肝硬化組及健康

2、人群組在HGF水平、c-Met染色強(qiáng)度等變量進(jìn)行One-Way ANOVA統(tǒng)計分析和Friedman非參數(shù)檢驗,評價肝癌組與其他兩組間是否存在顯著性差異。
  結(jié)果:血清HGF濃度在肝癌組、肝硬化組和正常對照組分別為0.609±0.134ng/ml、0.378±0.116ng/ml、0.271±0.083n/ml,肝癌組患者血清HGF水平明顯高于肝硬化組和正常對照組,差異具有顯著性(P<0.01)。不同體積的腫瘤之間血清HGF水平

3、存在顯著性差異(P<0.05),腫瘤體積越大則血清HGF水平越高。c-Met蛋白在HCC組織上呈陽性表達(dá),c-Met陽性染色主要定位于腫瘤細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì),而在癌旁組織及正常組織呈弱陽性和低表達(dá),差異具有顯著性意義,P<0.01。HCC組織c-Met陽性表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤分化程度等密切相關(guān),(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.HCC患者血清HGF水平較肝硬化及正常對照組明顯升高,差異具有顯著性。
  2.HCC患者術(shù)前

4、血清HGF水平與腫瘤大小有明顯正相關(guān)性,腫瘤體積越大則血清HGF水平越高。
  3.c-Met蛋白在HCC組織中表達(dá)強(qiáng)度明顯高于癌旁組織及正常肝組織,差異具有顯著性意義。
  4.c-Met表達(dá)異常與HCC病理分化程度等密切相關(guān)。
  第二部分 c-Met過表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建及索拉非尼耐藥特征觀察
  目的:評價c-Met過表達(dá)導(dǎo)致的細(xì)胞信號傳導(dǎo)異常對索拉非尼抑制肝癌細(xì)胞增殖的影響并尋找相應(yīng)治療對策。
  方法

5、:首先通過慢病毒載體將c-Met基因轉(zhuǎn)染至HepG2細(xì)胞,并使HepG2細(xì)胞能夠穩(wěn)定表達(dá)c-Met蛋白,通過嘌呤霉素篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株HepG2-met。通過MTT比色法法及AnnexinV_FITC和PI雙染法檢測細(xì)胞周期及凋亡的方法,評價索拉非尼對HepG2細(xì)胞/HepG2-met細(xì)胞增殖影響是否存在差異,確定c-Met蛋白表達(dá)異常升高對索拉非尼抵抗作用。通過Western Blot方法檢測c-Met蛋白及其下游mTOR信號蛋

6、白P70S6K、4E-BP1磷酸化水平在HepG2細(xì)胞/HepG2-met細(xì)胞之間的差異,尋找c-Met蛋白表達(dá)異常升高對索拉非尼抵抗作用的分子機(jī)制。在此基礎(chǔ)上通過聯(lián)合mTOR抑制藥物雷帕霉素逆轉(zhuǎn)索拉非尼耐藥現(xiàn)象。
  結(jié)果:通過RT-PCR檢測慢病毒感染的HtepG2細(xì)胞中c-Met mRNA確定慢病毒轉(zhuǎn)染MOI=20為最佳MOI值,通過2.5μg/ml嘌呤霉素持續(xù)作用10天篩選出抗嘌呤霉素的穩(wěn)定細(xì)胞株HepG2-met。Wes

7、tem blot方法分析c-Met的表達(dá)和磷酸化及mTOR信號途徑中P70S6K、4E-BP1蛋白磷酸化改變,顯示HepG2-met細(xì)胞在c-Met的表達(dá)和磷酸化及P70S6K、4E-BP1蛋白磷酸化水平上均明顯超過HepG2細(xì)胞。通過細(xì)胞生長曲線檢測發(fā)現(xiàn)HepG2-met具有較HepG2更為活躍的細(xì)胞增殖能力。MTT法檢測HepG2/HepG2-met細(xì)胞對索拉非尼增殖抑制敏感性:索拉非尼對HepG2/HepG2-met細(xì)胞增殖抑制作

8、用隨著藥物濃度的增加而逐漸增加,表現(xiàn)出劑量依賴性;HepG2-met具有一定的索拉非尼藥物作用抵抗特征。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測可以看出HepG2-met細(xì)胞處于S期的比例為65.5%,較HepG2細(xì)胞的39.92%明顯升高,提示HepG2-met增殖更為活躍,在應(yīng)用相同劑量的索拉非尼作用后HepG2-met細(xì)胞S期比例降至41.07%,細(xì)胞凋亡率為35.48%;HepG2細(xì)胞的S期比例降至25.89%,細(xì)胞凋亡率為63.42%,兩組間比較仍

9、有顯著性差異,提示索拉非尼對HepG2-met細(xì)胞增殖抑制作用有所下降,HepG2-met表現(xiàn)出對索拉非尼一定的耐藥性。當(dāng)HepG2-met組聯(lián)合應(yīng)用索拉非尼及小劑量的雷帕霉素后,S期比例降至32.03%,細(xì)胞凋亡率上升至65.01%,提示雷帕霉素可以部分逆轉(zhuǎn)HepG2-met細(xì)胞高表達(dá)c-Met造成的對索拉非尼一定耐藥性。
  結(jié)論:
  1.通過慢病毒轉(zhuǎn)染方式成功構(gòu)建出c-Met過表達(dá)的HepG2-met細(xì)胞株,c-Me

10、t表達(dá)水平較HepG2明顯升高。
  2.HepG2-met細(xì)胞株c-Met的表達(dá)和磷酸化水平升高,同時其下游信號如mTOR信號途徑中P70S6K、4E-BP1蛋白磷酸化較HepG2明顯升高。
  3.HepG2-met細(xì)胞株具有較HepG2更為活躍的細(xì)胞增殖能力。
  4.HepG2-met具有一定的索拉非尼藥物作用抵抗特征。
  5.雷帕霉素通過抑制mTOR信號途徑中P70S6K、4E-BP1蛋白磷酸化可以部

11、分逆轉(zhuǎn)HepG2-metR寸索拉非尼的耐藥作用。
  第三部分裸鼠荷人肝癌皮下模型的建立
  目的:通過臨床肝癌標(biāo)本建立裸鼠異種肝癌模型并對肝癌中HBV狀態(tài)作初步檢測。
  方法:采集肝移植患者肝癌病理組織,種植于裸鼠皮下,經(jīng)過多次傳代生長后,獲得可以穩(wěn)定生長與傳代的肝癌裸鼠模型。通過HE染色比較原代肝癌病例組織結(jié)構(gòu)與多次傳代后的移植性肝癌模型的病理結(jié)果,評價異種肝癌模型是否具有與原代相似的病理組織學(xué)特征。同時通過PC

12、R方法檢測與HBV相關(guān)性肝癌的動物模型中HBV DNA存在狀態(tài),初步探討HBV與HCC相關(guān)關(guān)系。
  結(jié)果:成功建立4例肝癌動物模型。異種移植腫瘤標(biāo)本和病人原發(fā)腫瘤標(biāo)本的病理學(xué)形態(tài)相似,保留了原發(fā)腫瘤的部分組織形態(tài)學(xué)特性。4例肝癌異種移植物模型腫瘤標(biāo)本分別進(jìn)行HBV DNA的S區(qū)、C區(qū)和X區(qū)三個獨立區(qū)域檢測,結(jié)果一例標(biāo)本S區(qū)、C區(qū)和X區(qū)均呈陽性,一例標(biāo)本S區(qū)和X區(qū)呈陽性,一例標(biāo)本S區(qū)和C區(qū)呈陽性。
  結(jié)論:
  1.

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