流式細胞術檢測無鎳奧氏體不銹鋼對L929細胞凋亡的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   金屬合金作為口腔修復材料應用于人體內,在人體生理環(huán)境中使用,對生命有機體會產生一定的作用和影響。生物相容性評價是研究醫(yī)用金屬材料生物性能的重要內容之一,目前新材料在用于人體之前都要求必須經過全面的生物相容性檢測。無鎳奧氏體不銹鋼(BIOSSN4)是中科院金屬研究所研制的一種新型的醫(yī)用金屬材料,這種材料優(yōu)良的機械性能已經通過實驗得到驗證,但其生物相容性還需要進一步的研究。本實驗就是從生物學角度,通過細胞培養(yǎng)及流式細胞

2、儀檢測,來了解無鎳奧氏體不銹鋼和其他4種醫(yī)學常用的金屬合金對L929細胞凋亡的影響,通過比較,進而評價一下無鎳奧氏體不銹鋼的生物相容性。
   材料與方法:
   1、細胞培養(yǎng)
   小鼠成纖維細胞L929用含10%胎牛血清的RPMI1640細胞培養(yǎng)基在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。
   2、流式細胞儀檢測細胞在凋亡不同階段的凋亡數(shù)量
   將5種金屬合金(無鎳奧氏體不銹剛、317L奧

3、氏體不銹鋼金合金、鈷鉻合金、鎳鉻合金、金合金)及陰性對照組的浸提液與L929細胞聯(lián)合培養(yǎng)24、48小時后分別進行EGFP,PI雙染色,然后通過流式細胞儀檢測不同實驗組細胞在凋亡不同時期的凋亡率。
   3、熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞
   滴一滴上述各組染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞,分別于熒光顯微鏡下觀察Annexin V-EGFP熒光信號呈綠色,PI熒光信號呈紅色。
   結果:
  

4、實驗組細胞經AnnexinV-EGFP和PI雙染色后,熒光顯微鏡觀察可見細胞在凋亡不同時期的形態(tài)變化。流式細胞儀檢測結果表明各實驗組引起的細胞凋亡率是不同的。其中金合金組細胞凋亡率最低并且接近陰性對照組,無鎳奧氏體不銹鋼組引起的細胞凋亡率與金合金組較接近,其它金屬合金凋亡率均高于金合金組,其中鎳鉻合金引起的凋亡率最高且遠高于金合金組,其凋亡率由低到高的順序為:金合金<無鎳奧氏體不銹鋼<鈷鉻合金<317L奧氏體不銹鋼<鎳鉻合金。
 

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