不同齒科合金通過線粒體途徑誘導(dǎo)L929細(xì)胞凋亡的觀察.pdf

1、目的：齒科合金已經(jīng)廣泛應(yīng)用于口腔修復(fù)領(lǐng)域中，在口腔內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境中，由于合金材料所析出的金屬離子會(huì)對(duì)口腔細(xì)胞和組織形成不良刺激，所以對(duì)齒科合金生物相容性的研究一直是國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注熱點(diǎn)之一。本研究應(yīng)用免疫熒光和蛋白印記的方法檢測了5種齒科合金及新研制的3種合金浸提液引起小鼠L929細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，線粒體內(nèi)促凋亡蛋白的表達(dá)情況，探討了金屬材料誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，為進(jìn)一步揭示細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及從分子水平上評(píng)價(jià)材料的生物相容性提供

2、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：①L929細(xì)胞用含10％胎牛血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2.的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。②收集陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的L929細(xì)胞(3×106個(gè))于Ep管中，PBS清洗3遍，加入羅丹明123染液40ug/ml，37℃避光孵育60min，流式細(xì)胞儀檢測羅丹明123的熒光強(qiáng)度。③用熒光檢測試劑盒檢測細(xì)胞色素C在細(xì)胞內(nèi)分布變化。④Western Blotting檢測陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的L929細(xì)胞的細(xì)胞色

3、素C在線粒體和胞漿中的表達(dá)。 結(jié)果：⑴各組細(xì)胞隨處理時(shí)間的延長，其羅丹明123熒光強(qiáng)度逐漸減弱，表明了線粒體膜電位發(fā)生了去極化。48小時(shí)的結(jié)果為：陰性對(duì)照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>鎳鉻合金組>1號(hào)合金組>2號(hào)合金組>3號(hào)合金組。72小時(shí)的結(jié)果為：陰性對(duì)照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>1號(hào)合金組>鎳鉻合金組>3號(hào)合金>2號(hào)合金組。⑵48小時(shí)處理組，除鈷鉻合金組，2號(hào)合金組，3號(hào)合金組外，細(xì)胞中細(xì)胞色素C蛋白的熒

4、光分布為一些粗點(diǎn)或細(xì)塊狀。72小時(shí)處理組，細(xì)胞色素C蛋白的熒光在胞漿中分布較為明顯，為彌散的細(xì)點(diǎn)狀。⑶在細(xì)胞線粒體和胞漿中均有細(xì)胞色素C的表達(dá)，并且隨時(shí)間的延長，線粒體中的細(xì)胞色素C表達(dá)量逐漸減少，胞漿中的表達(dá)量逐漸增多。 結(jié)論：①7種齒科合金中的金屬離子都會(huì)不同程度地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且其凋亡途徑為線粒體途徑。②在凋亡的過程中，伴有促凋亡蛋白細(xì)胞色素C由線粒體到胞漿的釋放過程及線粒體跨膜電位的下降。③金屬合金可能引起細(xì)胞色素C表達(dá)