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1、目的:齒科合金已經(jīng)廣泛應(yīng)用于口腔修復(fù)領(lǐng)域中,在口腔內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境中,由于合金材料所析出的金屬離子會(huì)對(duì)口腔細(xì)胞和組織形成不良刺激,所以對(duì)齒科合金生物相容性的研究一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注熱點(diǎn)之一。本研究應(yīng)用免疫熒光和蛋白印記的方法檢測(cè)了5種齒科合金及新研制的3種合金浸提液引起小鼠L929細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),線(xiàn)粒體內(nèi)促凋亡蛋白的表達(dá)情況,探討了金屬材料誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,為進(jìn)一步揭示細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及從分子水平上評(píng)價(jià)材料的生物相容性提供
2、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:①L929細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5%CO2.的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。②收集陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的L929細(xì)胞(3×106個(gè))于Ep管中,PBS清洗3遍,加入羅丹明123染液40ug/ml,37℃避光孵育60min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)羅丹明123的熒光強(qiáng)度。③用熒光檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞色素C在細(xì)胞內(nèi)分布變化。④Western Blotting檢測(cè)陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的L929細(xì)胞的細(xì)胞色
3、素C在線(xiàn)粒體和胞漿中的表達(dá)。 結(jié)果:⑴各組細(xì)胞隨處理時(shí)間的延長(zhǎng),其羅丹明123熒光強(qiáng)度逐漸減弱,表明了線(xiàn)粒體膜電位發(fā)生了去極化。48小時(shí)的結(jié)果為:陰性對(duì)照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>鎳鉻合金組>1號(hào)合金組>2號(hào)合金組>3號(hào)合金組。72小時(shí)的結(jié)果為:陰性對(duì)照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>1號(hào)合金組>鎳鉻合金組>3號(hào)合金>2號(hào)合金組。⑵48小時(shí)處理組,除鈷鉻合金組,2號(hào)合金組,3號(hào)合金組外,細(xì)胞中細(xì)胞色素C蛋白的熒
4、光分布為一些粗點(diǎn)或細(xì)塊狀。72小時(shí)處理組,細(xì)胞色素C蛋白的熒光在胞漿中分布較為明顯,為彌散的細(xì)點(diǎn)狀。⑶在細(xì)胞線(xiàn)粒體和胞漿中均有細(xì)胞色素C的表達(dá),并且隨時(shí)間的延長(zhǎng),線(xiàn)粒體中的細(xì)胞色素C表達(dá)量逐漸減少,胞漿中的表達(dá)量逐漸增多。 結(jié)論:①7種齒科合金中的金屬離子都會(huì)不同程度地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且其凋亡途徑為線(xiàn)粒體途徑。②在凋亡的過(guò)程中,伴有促凋亡蛋白細(xì)胞色素C由線(xiàn)粒體到胞漿的釋放過(guò)程及線(xiàn)粒體跨膜電位的下降。③金屬合金可能引起細(xì)胞色素C表達(dá)
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