不同齒科合金對(duì)L929細(xì)胞的毒性及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的: 齒科合金作為口腔修復(fù)的常用材料，在口腔內(nèi)行使功能時(shí)，會(huì)發(fā)生各種形式的腐蝕。細(xì)胞毒性一直是醫(yī)用金屬材料使用中的重要問題之一。隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，生物材料生物相容性的研究手段逐漸多樣化，其評(píng)價(jià)已從整體、細(xì)胞水平進(jìn)入了分子水平。本研究應(yīng)用MTT法和RT-PCR法比較了在細(xì)胞水平和分子水平上5種齒科合金浸提液對(duì)小鼠L929細(xì)胞的影響，為從分子水平上評(píng)價(jià)材料的生物相容性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法: 一、細(xì)胞培

2、養(yǎng) L929細(xì)胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。 二、本實(shí)驗(yàn)室L929細(xì)胞生長(zhǎng)代謝曲線將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的L929細(xì)胞按1～10×104個(gè)/ml制成10種不同濃度的細(xì)胞懸液，72小時(shí)后加入MTT液繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后加入DMSO，在波長(zhǎng)為490nm的條件下測(cè)其光密度值(OD值)，計(jì)算各濃度組均值制圖。 三、MTT實(shí)驗(yàn)根據(jù)上述曲線確定接種細(xì)胞懸液的濃度。以5種金屬浸提

3、液及陰性對(duì)照培養(yǎng)L929細(xì)胞48小時(shí)后測(cè)其OD值，計(jì)算細(xì)胞增殖率P。 四、RT-PCR實(shí)驗(yàn)將5種金屬合金浸提液及陰性對(duì)照與L929細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，用RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞caspase-3、caspase-8和caspase-9的mRNA表達(dá)。 結(jié)果: 一、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果 當(dāng)接種細(xì)胞量<4000個(gè)/孔時(shí)各組的差異不明顯。當(dāng)細(xì)胞量≥7000個(gè)/孔時(shí)，OD值隨著接種細(xì)胞量的增加反而降低。最佳細(xì)胞狀態(tài)為5

4、000-7000個(gè)/孔。 二、MTT實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性 5種合金浸提液在MTT比色法結(jié)果中，培養(yǎng)48h后除銅浸提液組的細(xì)胞毒性為4級(jí)外，其它各浸提液組均為0級(jí)。 三、5種合金浸提液對(duì)L929細(xì)胞caspase-3、caspase-8和caspase-9mRNA表達(dá)的影響 5種合金浸提液及陰性對(duì)照培養(yǎng)的L929細(xì)胞的caspase-8mRNA無明顯差異caspase-3和caspase-9mRNA差異顯著，由

5、低到高依次為銅合金組<陰性對(duì)照組<金合金組<鈷鉻合金組<銀鈀合金組<鎳鉻合金組。 結(jié)論: 1、在分子水平上研究生物材料對(duì)L929細(xì)胞的影響較在細(xì)胞水平上更靈敏。 2、5種齒科合金中的金屬離子都會(huì)不同程度地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且其凋亡途徑為線粒體途徑。 3、L929細(xì)胞經(jīng)5種齒科合金浸提液培養(yǎng)48h后的caspase-3和caspase-9mRNA水平由低到高依次為：銅合金<陰性對(duì)照和金合金<鈷鉻合金<銀鈀合金<