Orexin A對(duì)蘇鐘母豬下丘腦-垂體-性腺軸作用機(jī)理的研究.pdf

1、Orexin是近年發(fā)現(xiàn)的一種神經(jīng)肽，分為orexin A和orexin B.Orexin通過其受體發(fā)揮作用，參與機(jī)體攝食、能量穩(wěn)態(tài)、睡眠和覺醒周期、生殖、內(nèi)臟活動(dòng)和神經(jīng)內(nèi)分泌等方面的調(diào)節(jié)。Orexin在大鼠、小鼠和羊等動(dòng)物的分布定位文獻(xiàn)中已有報(bào)道。有關(guān)orexin參與生殖調(diào)控的資料大多數(shù)是在羊、鼠和人上獲得的，并且資料有限。關(guān)于orexin受體在豬體內(nèi)的分布定位及其參與豬生殖調(diào)控的研究文獻(xiàn)中未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)以蘇種豬為研究對(duì)象，采用

2、免疫組織化學(xué)法、RT-PCR和放射免疫測(cè)定法（RIA）等研究了orexin受體在豬體內(nèi)的分布定位，發(fā)情周期不同時(shí)期orexin及其受體的變化規(guī)律以及側(cè)腦室注射orexin A后對(duì)下丘腦和垂體中相關(guān)神經(jīng)肽的表達(dá)和血清LH水平的影響，以期為orexin調(diào)控豬的生殖活動(dòng)提供生理學(xué)和形態(tài)學(xué)資料。
　　 一、Orexin受體在豬體內(nèi)的分布定位
　　 本實(shí)驗(yàn)用免疫組織化學(xué)方法研究了12頭（雌雄各半）1～2月齡蘇鐘豬腦、脊髓、部分內(nèi)臟

3、器官和內(nèi)分泌腺內(nèi)orexin受體（OXR）的分布定位，結(jié)果如下：
　　 1 Orexin受體1（OX1R）在豬前腦、腦干、脊髓、部分內(nèi)臟器官和內(nèi)分泌腺均有分布.在前腦OX1R免疫陽(yáng)性神經(jīng)元主要分布于下丘腦前區(qū)、視上核、室旁核、室周核、弓狀核和結(jié)節(jié)乳頭體核。在丘腦室旁核和斜角帶也有分布。在腦干，主要分布于中縫蒼白核和藍(lán)斑；在內(nèi)臟器官，主要分布于卵巢、睪丸、附睪、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、胰和腎；在內(nèi)分泌腺，主要分布于垂體和甲狀腺

4、。
　　 2 Orexin受體2（OX2R）在豬前腦、腦干、部分內(nèi)臟器官和內(nèi)分泌腺均有分布。在前腦，OX2R免疫陽(yáng)性神經(jīng)元主要分布于豬下丘腦前區(qū)、視前區(qū)、視上核、視交叉上核、室周核、室旁核，在丘腦背內(nèi)側(cè)核、嗅結(jié)節(jié)和斜角帶也有分布。在腦干，主要分布于舌下神經(jīng)核和迷走神經(jīng)背側(cè)運(yùn)動(dòng)核；在內(nèi)臟器官和內(nèi)分泌腺，主要分布于肺、小腸、垂體和腎上腺等。OX1R和OX2R的分布存在差異。
　　 二、Preproorexin和OX1R mR

5、NA在蘇鐘豬發(fā)情周期不同時(shí)期下丘腦-垂體。卵巢軸中的表達(dá)
　　 為了探討orexin與生殖的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)用相對(duì)定量RT-PCR方法，對(duì)16頭蘇鐘母豬在發(fā)情周期不同時(shí)期（發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和問情期，n=4）下丘腦、垂體和卵巢中preproorexin和OXIR mRNA表達(dá)的變化規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果如下：
　　 1 Preproorexin mRNA和OXIR mRNA在蘇鐘母豬下丘腦、垂體和卵巢（HPG軸）均有表

6、達(dá)，而且在生殖周期不同時(shí)期呈現(xiàn)規(guī)律性變化。
　　 2 Preproorexin mRNA在母豬發(fā)情前期的HPG軸中表達(dá)最高，隨后在發(fā)情期開始下降，在發(fā)情后期降到最低，而在間情期又逐漸上升。
　　 3 OX1R mRNA在發(fā)情前期的HPG軸中表達(dá)量最低，在發(fā)情期開始上升，在發(fā)情后期達(dá)到最高，隨后，在間情期開始下降，至發(fā)情前期降到最低。
　　 4 Preproorexin的表達(dá)與OX1R的表達(dá)呈互補(bǔ)關(guān)系，提示orex

7、in通過OX1R發(fā)揮作用。
　　 三、去卵巢豬側(cè)腦室微量注射orexin A對(duì)血清LH水平的影響
　　 為了探討orexin A對(duì)促黃體生成素（LH）的影響，本實(shí)驗(yàn)用RIA法，檢測(cè)了10頭去卵巢蘇鐘母豬側(cè)腦室注射orexin A或生理鹽水（對(duì)照組）（n=5）前1.5h至注射后3 h（血樣每10 min采集一次）血清中LH濃度的變化，結(jié)果如下：
　　 1側(cè)腦室注射orexinA后，可以短期地促進(jìn)LH的分泌釋放。

8、r>　　 2側(cè)腦室注射orexin A10 min后，血清LH濃度開始上升，在0.5 h達(dá)到高峰，1.5 h后基本恢復(fù)至注射前水平。
　　 四、側(cè)腦室注射orexin A對(duì)去卵巢蘇鐘母豬下丘腦和垂體中生殖激素和相關(guān)神經(jīng)肽mRNA表達(dá)的影響
　　 為了探討orexinA對(duì)生殖調(diào)控的途徑。本實(shí)驗(yàn)用相對(duì)定量RT-PCR方法，研究了10頭去卵巢蘇鐘母豬側(cè)腦室注射orexinA或生理鹽水后，對(duì)下丘腦GnRH、NPY和POMC m

9、RNA及垂體LH、FSH、POMC和ghrelin mRNA表達(dá)的影響，結(jié)果如下：
　　 1側(cè)腦室注射orexinA后，可促進(jìn)下丘腦GnRH mRNA的表達(dá)，但降低NPY和POMC mRNA的表達(dá)。
　　 2側(cè)腦室注射orexinA后，可促進(jìn)垂體LH和FSH的表達(dá)，但對(duì)FSH的作用差異不顯著（P>0.05）；可降低ghrelin和POMC的表達(dá)，但對(duì)POMC的作用差異不顯著（p>0.05）。
　　 上述研究表明，

10、orexin受體在豬下丘腦、垂體和卵巢均有分布，為orexin參與生殖調(diào)控提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)。Preproorexin mRNA和OX1R mRNA在不同發(fā)情周期豬下丘腦、垂體和卵巢的表達(dá)呈現(xiàn)規(guī)律性變化，提示orexin可能與某些生殖激素的分泌有關(guān)。側(cè)腦室注射orexinA后，orexin能促進(jìn)下丘腦GnRH mRNA的表達(dá)，促進(jìn)垂體LH mRNA的表達(dá)和升高血清LH的水平，同時(shí)也影響下丘腦和垂體NPY、POMC和ghrelin等神經(jīng)肽的