SeNHX1轉(zhuǎn)入洋桔梗的耐鹽初步研究.pdf

1、高鹽是限制作物生長、發(fā)育和產(chǎn)量的主要脅迫之一。當(dāng)前，全球人口不斷增加，20％的灌溉農(nóng)業(yè)遭受鹽脅迫，培育高抗鹽的植物新品種，開發(fā)利用鹽堿地，已經(jīng)成為一個亟待解決的全球性問題。近幾年，分子生物學(xué)發(fā)展迅速，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已逐漸替代傳統(tǒng)育種技術(shù)，成為耐鹽領(lǐng)域研究的焦點。隨著植物耐鹽機制的深入研究，大量的耐鹽相關(guān)基因被成功分離與表達，一系列轉(zhuǎn)基因的高抗鹽植株被相繼報道。 本實驗通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因(SeNHX1

2、)轉(zhuǎn)入洋桔梗，以獲得高耐鹽的抗性植株。其中，目的基因SeNHX1來源于世界上最耐鹽的植物之一鹽角草，將其插入帶有雙35S啟動子和增強子的高效表達載體pBin438，構(gòu)建雙元表達載體pBin438-SeNHX1。轉(zhuǎn)化受體洋桔梗為全球七大切花之一，洋桔梗在再生體系與轉(zhuǎn)基因方面已有相關(guān)報道，本研究在原有體系的基礎(chǔ)上，進一步優(yōu)化了洋桔梗的葉片再生體系，農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化體系，獲得葉片分化培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L愈傷組

3、織分化率達70％；苗伸長培養(yǎng)基MS+GA30.8+NAA0.1+IAA0.2；生根培養(yǎng)1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L，生根率達42％；最優(yōu)的轉(zhuǎn)化條件為菌液濃度為OD600值0.6，浸染20分鐘，共培養(yǎng)3天，AS濃度100μmol/L，Cef濃度300mg/L，Kan濃度40mg/L。通過Kan和NaCl的逐步篩選得到32株抗性苗，對部分植株進行分子檢測，初步證明目的基因已整合到洋桔梗的基因組中。200mmol/