海洋放線菌活性菌株的篩選及1023菌株次級代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、海洋放線菌分布廣，種類多，可產(chǎn)生許多結(jié)構(gòu)新穎、功能獨特及毒副作用較低的次級代謝產(chǎn)物，是尋找新藥或先導化合物的重要資源。本論文對13株分離自深海底泥和海洋動植物體的海洋放線菌的抗菌、抗乙酰膽堿酯酶和抗腫瘤等活性進行了分析，并對其中一株具有較強體外抗腫瘤活性菌株的次級代謝產(chǎn)物進行了較系統(tǒng)的研究，旨在發(fā)掘具有潛在應用前景的活性化合物，為開發(fā)新的微生物藥物奠定基礎。 采用改進的Ellman法，微量液體稀釋法和MTT法，分別對13株海洋放

2、線菌的3種培養(yǎng)基發(fā)酵液乙酸乙酯提取物的抗乙酰膽堿酯酶活性、抗菌活性和體外抗腫瘤活性進行檢測，結(jié)果表明：有92.3％的提取物(濃度為100μg/mL)對AChE的抑制率大于50％，其中01菌株的海水改良YSP培養(yǎng)基提取物和18菌株的海水YMG培養(yǎng)基提取物具有較強的活性，當提取物濃度降到20μg/mL時，對AChE的抑制仍分別可達51.2％和53.1％；有9個提取物對大腸桿菌或枯草芽孢桿菌有抑制作用，占總供測樣品的23.1％，其中對大腸桿菌

3、和枯草芽孢桿菌有抑制作用的分別為5.1％和20.5％；有14個提取物(濃度為100μg/mL)具有體外抗腫瘤活性(對KB或HepG2的抑制率=50％)，占總供測樣品的35.9％，其中菌株1023具有很強的活性，它的3個培養(yǎng)基提取物在20μg/mL時對腫瘤細胞KB的抑制率都在60％以上。 采用形態(tài)學鑒定方法及16SrDNA序列分析技術對1023菌株進行鑒定，將其歸類為鏈霉菌屬(Streptomyces sp.)。 以半海水

4、高氏一號為培養(yǎng)基，200L發(fā)酵罐發(fā)酵制備1023菌株發(fā)酵液120L。采用硅膠柱層析、中壓反相柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析和重結(jié)晶等方法從發(fā)酵液的乙酸乙酯萃取物中分離到8個化合物(mPm7，HWX13。HWX23，HWX27，HWX29，HWX33，HWX35，HWX39)。利用MS，NMR和紅外等波譜技術，鑒定它們的結(jié)構(gòu)。化合物mPm7為valinomycin，其余7個為含有nonactic acid及其衍生物：HWX

5、13，HWX27，HWX29，HWX33，HWX35，HWX39分別是homononactic acid，F(xiàn)eigrisolide C，nonactic acid acetate，homononactic methylester，nonactic methylester，和nonactic acid，HWX23的結(jié)構(gòu)鑒定為methyl 2-(5-(3-hydroxybutyl)-tetrahydrofuran-2-yl)propanoa

6、te，是新化合物。 對這8個化合物進行了生物活性的測試。mPm7對Hela細胞的IC50為3.04ng/mL，對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和結(jié)核分枝桿菌的MIC均為50μg/mL，對白色假絲酵母的MIC為1.56μg/mL，對啤酒酵母的的MIC為6.25μg/mL。其余7個化合物沒檢測到明顯的生物活性，新化合物HWX23的其它活性有待進一步的研究。 本文的研究結(jié)果表明，海洋放線茵中蘊藏著較豐富的抗菌和抗腫瘤活性物質(zhì)產(chǎn)生菌，具