雙酶體系的共固定化及其動力學(xué)研究.pdf

1、本文選取工業(yè)上較為常用、價(jià)格低廉的硅藻土和海藻酸鈣為載體分別用吸附法和包埋法共固定化α-淀粉酶和糖化酶雙酶體系。其方法簡單，操作簡便，成本低廉，更適合工業(yè)化大生產(chǎn)。 本文研究了雙酶比例和固定化條件對兩種共固定化酶反應(yīng)速率的影響。得到硅藻土共固定化雙酶體系的最佳共固定化條件為：載體(g)∶糖化酶(U)∶α-淀粉酶(U)=1∶100∶160；溫度為5℃-15℃；pH為4.5-5.5。海藻酸鈣共固定化雙酶體系的最佳共固定化條件為：海藻

2、酸鈉濃度為3％-4％，CaCl2濃度為2％；酶濃度為糖化酶20U/ml，α-淀粉酶24U/ml；糖化酶(U)∶α-淀粉酶(U)=1∶1.2；溫度為50℃-70℃；pH為4.0-5.5。并比較了兩種共固定化酶的熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、儲藏穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性，得出兩種共固定化酶的最適反應(yīng)溫度分別為50℃-60℃(硅藻土)和55℃-65℃(海藻酸鈣)；最適反應(yīng)pH均為5.0；其米氏常數(shù)Km為16.830mg/ml(硅藻土)和10.467mg/m

3、l(海藻酸鈣)。 而共固定化酶的動力學(xué)研究以硅藻土共固定化酶為研究對象，是建立在游離雙酶協(xié)同水解淀粉動力學(xué)和固定化酶在受產(chǎn)物抑制時(shí)的動力學(xué)基礎(chǔ)上，并提出了共固定化酶的動力學(xué)模型：協(xié)同作用階段α-淀粉酶的水解作用存在外擴(kuò)散阻力和內(nèi)擴(kuò)散阻力，而糖化酶僅受到內(nèi)擴(kuò)散阻力；協(xié)同作用結(jié)束后糖化酶的水解反應(yīng)同時(shí)受到外擴(kuò)散阻力和內(nèi)擴(kuò)散阻力的影響，并推導(dǎo)出其動力學(xué)方程，通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果和模擬計(jì)算結(jié)果的比較，兩者吻合的較好。該動力學(xué)模型在一定范圍內(nèi)能較