肝臟血供干預(yù)后組織壞死和凋亡的MRI實驗研究.pdf

1、第一部分目的：通過對大鼠肝臟血供干預(yù)，分為同時阻斷肝右葉動脈和門靜脈血供或單純阻斷肝右葉門靜脈分支，造成肝右葉壞死和凋亡的組織病理模型，采用MRI、DWI、MRS和造影劑動態(tài)增強等先進(jìn)的成像方法，觀察大鼠肝臟組織發(fā)生壞死或凋亡后的MRI形態(tài)改變和信號變化特點，探索DWI、MRS和造影劑動態(tài)增強等MRI功能成像新技術(shù)對大鼠肝臟組織發(fā)生壞死或凋亡等病理改變的顯示能力和鑒別特點。 材料與方法：78只大白鼠隨機(jī)分成13組，每組6只，A1

2、、B1、c1、D1、E1、F1六組動物采用相同的手術(shù)方法同時結(jié)扎肝動脈右支和門靜脈右支，制作肝組織壞死模型。A2、B2、C2、D2、E2、F2六組動物單獨結(jié)扎門靜脈右支，制作肝組織大片凋亡模型，另6只大鼠為假手術(shù)對照組。各組實驗大鼠于手術(shù)后不同的時間點進(jìn)行MRI檢查，A(包括A1和A2)、B、C、D、E、F各組大鼠的結(jié)扎術(shù)后MRI檢查時間點分別為3h、12h、24h、3d、7d、14d。MRI檢查結(jié)束后立即處死動物和取得肝臟標(biāo)本，進(jìn)行普

3、通HE染色、TUNEL染色、透視電鏡等病理檢查。電鏡采用半膜定位法透視觀察。MRI采用Marconi1.5TEdgeEclipseTMMRI成像儀，每例均進(jìn)行橫斷面T1WI、T2WI和冠狀面T2WI普通成像，然后進(jìn)行DWI成像，b值分別為100，300，500。MRS采用1H單體素PRESS法，體素大小為3．0×3．0×3．0mlll3，TR／TE：1500／35．0ms和1500／135．0ms。普通MRI和DWI圖像采用血供干預(yù)后右

4、葉與其左葉的信號進(jìn)行比較的方法判斷異常變化。MRS則通過測量Cr、Glx、Cho、Lac、Lip波峰高度和波峰下面積來進(jìn)行組間比較和統(tǒng)計學(xué)分析。統(tǒng)計軟件使用SPSS10．0版本。均數(shù)比較采用t檢驗。兩組血供干預(yù)后肝右葉的信號強度或MRS結(jié)果，分別與正常對照組比較，P值取0.05. 結(jié)果：動物實驗操作非常順利，麻醉和結(jié)扎手術(shù)成功率93．8％。普通MRI和功能MRI檢查均獲得了良好的圖像和波譜分析曲線。HE染色顯示右側(cè)肝動脈與門靜脈

5、分支均結(jié)扎后，肝右葉發(fā)生凝固性壞死，肝細(xì)胞壞死崩解，早期有少量凋亡細(xì)胞。單獨右側(cè)門靜脈分支結(jié)扎后，肝右葉萎縮，3h即出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，24h達(dá)高峰，隨后出現(xiàn)少量壞死細(xì)胞，凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸減少。肝左葉代償性肥大，增殖指數(shù)增加，至14天最高。肝右葉門靜脈分支及肝動脈分支同時結(jié)扎后，肝組織在DWI上早期即呈高信號，中晚期在常規(guī)磁共振檢查序列T1WI、T2WI上呈長T1長T2表現(xiàn)。單純門靜脈右支結(jié)扎后肝右葉在T1WI上呈較高信號，T2WI呈等信號，7

6、2小時后出現(xiàn)斑點狀高信號，DWI上早期呈信號減低改變，后期呈等信號。肝組織壞死時MRS表現(xiàn)為Lac增高，Cho進(jìn)行性減低。單純門靜脈血供中斷后的肝右葉Lac、Glx、Lip代謝物質(zhì)波峰高度及波峰下面積均較正常對照組輕度上升，Cho較對照組比較下降，Cho／Lip的比值明顯下降。動態(tài)增強MRI顯示動脈早期肝右葉明顯強化，但是在門靜脈期強化程度明顯低于肝左葉。 結(jié)論：通過肝動脈+門靜脈分支結(jié)扎或單純門靜脈分支結(jié)扎可以制作肝細(xì)胞壞死或

7、凋亡的動物模型，同時，TUNEL染色可以作為檢測細(xì)胞凋亡的特異性方法。普通MRI成像時，肝組織細(xì)胞壞死和凋亡在T2WI和T2WI上有明顯的信號差異表現(xiàn)。結(jié)合功能MR檢查，包括DWI、MRS和動態(tài)增強MRI檢查，可以區(qū)分肝臟細(xì)胞發(fā)生血流中斷后發(fā)生的不同病理改變：壞死或凋亡。 第二部分目的：通過手術(shù)結(jié)扎大鼠門靜脈右支的方法制作肝組織大面積凋亡的動物模型，并通過MRI和病理學(xué)方法對其進(jìn)行對照研究，評價MRI、DWI和增強MRI對肝臟大

8、面積凋亡的診斷價值。 材料與方法：采用S-D大鼠42只，隨機(jī)分7組。A組為假手術(shù)對照組，B、C、D、E、F、G組大鼠分別于門靜脈右支結(jié)扎后3h、12h、24h、3d、7d、14d進(jìn)行磁共振成像，檢查結(jié)束后進(jìn)行肝臟標(biāo)本病理檢查，包括HE染色、TUNEL染色。將病理結(jié)果與MRI、DWI和增強MRI資料進(jìn)行對照分析。 結(jié)果：通過門靜脈分支結(jié)扎成功制作肝細(xì)胞大片凋亡的動物模型。肝細(xì)胞大片凋亡早期在T1WI上呈略高信號，T2WI上

9、為中等略低信號，隨時間延長至72小時，T2WI上肝右葉內(nèi)可見斑片狀稍高信號灶，在T1WI上仍為低信號。在DWI上以等低信號或肝葉內(nèi)出現(xiàn)斑片狀稍高信號影為主。增強MRI早期，病灶部位表現(xiàn)為明顯均勻強化，但是在門脈期增強明顯低于肝左葉。 結(jié)論：肝組織發(fā)生大片細(xì)胞凋亡后在普通MRI、增強MRI成像和DWI上均有較明顯的特征性表現(xiàn)，各種序列綜合表現(xiàn)可以較早期和較敏感地顯示肝組織細(xì)胞大片凋亡的存在。 第三部分目的：探討門靜脈右支結(jié)

10、扎后，肝細(xì)胞凋亡與增殖的變化規(guī)律。 方法：S—D大鼠78只，隨機(jī)分成假手術(shù)對照組、HA+PV組和PV組，觀察術(shù)后3h、12h、24h、3d、7d、14d肝葉的大體形態(tài)，HE染色、電鏡、TUNEL和免疫組化法觀察肝細(xì)胞凋亡和增殖，并進(jìn)行定量分析。 結(jié)果：右側(cè)肝動脈與門靜脈分支均結(jié)扎后，肝右葉發(fā)生凝固性壞死，肝細(xì)胞壞死，早期有少量凋亡細(xì)胞：單獨右側(cè)門靜脈分支結(jié)扎后，肝右葉萎縮，3h即出現(xiàn)凋亡，24h達(dá)高峰，隨后出現(xiàn)壞死，凋亡