PF40基因與DREB轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究利用分子生物學(xué)試驗(yàn)手段,構(gòu)建了Pc3300IS-DREB1A、pAHC40和pAHCRNAi質(zhì)粒載體,利用農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化法和基因槍轉(zhuǎn)化法分別將其導(dǎo)入小麥(Triticumaestivum L.)基因組中. PF40基因是從谷子未成熟種子cDNA文庫(kù)中獲得的一個(gè)與分蘗發(fā)育密切相關(guān)的基因.為探討該基因?qū)π←湹挠绊?以分蘗特性差異明顯的Y18和S99-6123兩個(gè)冬小麥品種為受體材料,用帶有PF40基因和bar基因的質(zhì)粒轟擊小麥

2、幼胚愈傷組織.經(jīng)含有5mg/L Basta的培養(yǎng)基上四次抗性篩選后移栽溫室,共獲得613株再生植株,經(jīng)PCR檢測(cè)共獲得43株陽(yáng)性植株,PCR陽(yáng)性轉(zhuǎn)化率為6.61﹪.將T<,0>代26個(gè)轉(zhuǎn)基因植株的種子種成T<,1>代株系,從轉(zhuǎn)基因后代中隨機(jī)選取19株進(jìn)行的Southern blot分析,初步斷定Southern blot陽(yáng)性率為5.95﹪.經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)和Southern雜交分析,證明PF40基因已經(jīng)整合到小麥基因組中并且可以遺傳.用統(tǒng)

3、計(jì)學(xué)中X<'2>測(cè)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)26個(gè)株系的 PF40 轉(zhuǎn)基因后代中有12株符合孟德?tīng)?:1的遺傳分離比(X<'2>測(cè)驗(yàn)中P>0.05).結(jié)果表明PF40基因在后代中得到較穩(wěn)定遺傳,并以顯性方式遺傳給后代.同時(shí)對(duì)T<,1>代轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行分蘗和成穗數(shù)的調(diào)查結(jié)果顯示,Y18正義、S99-6123正義、干擾載體與對(duì)照均有顯著性差異,只有Y18干擾載體與對(duì)照的差異不顯著,以上結(jié)果表明PF40基因?qū)π←湹姆痔Y具有一定的調(diào)空作用. 以冬小麥品種

4、輪選987幼苗的莖尖分生組織為受體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將與抗逆相關(guān)的逆境誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子DREB1A和bar基因的質(zhì)粒Pc3300IS-DREBlA導(dǎo)入小麥基因組中,與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后共獲得110棵轉(zhuǎn)化幼苗.經(jīng)PCR擴(kuò)增鑒定,其中10棵幼苗證明含有DREB1A基因,轉(zhuǎn)化率達(dá)到9.09﹪.T<'1>代檢測(cè)結(jié)果表明,所轉(zhuǎn)基因已經(jīng)穩(wěn)定遺傳給后代,并且所得株系基本符合孟德?tīng)柗蛛x比3∶1. 本研究表明將PF40基因?qū)胄←湆?duì)小麥的分蘗數(shù)和成穗數(shù)存

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