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文檔簡介
1、目的:本研究通過比較Etoposide及放射線照射對K562、HL-60、Jurkat細(xì)胞的鈉氫交換蛋白(Na+/H+exchanger1,NHE1)表達(dá)水平及細(xì)胞內(nèi)pH值(intracellularpH,pHi)的影響,探討在依托泊苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中NHE1表達(dá)變化及其調(diào)控凋亡過程的機(jī)制。
方法:應(yīng)用Etoposide處理或照射5Gy放射劑量K562、HL-60、Jurkat細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。分別采用實時定量RT-P
2、CR技術(shù)及Western blot檢測物理化學(xué)因素所至DNA損傷對NHE1的tuRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平的影響。應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡測定K562、HL-60、Jurkat細(xì)胞pHi的變化。應(yīng)用DNA片段化檢測和遠(yuǎn)末端缺口標(biāo)記(NUNEL)法分析細(xì)胞凋亡。同時應(yīng)用NHE1特異抑制劑卡立泊來德(Cariporide)作用于K562、HL-60細(xì)胞,比較二種細(xì)胞凋亡及p Hi的變化。
結(jié)果:Etoposide作用24小時后能
3、有效地誘導(dǎo)BCR/ABL陰性的HL-60、Jurkat細(xì)胞凋亡,但對BCR/ABL陽性的K562細(xì)胞卻沒有明顯的誘導(dǎo)凋亡的作用。放射線照射也只能有效的誘導(dǎo)HL-60、Jurkat細(xì)胞凋亡,而對K562細(xì)胞也沒有明顯地誘導(dǎo)凋亡的作用。Etoposide和放射線照射能使HL-60、Jurkat細(xì)胞中NHE1 mRNA水平和蛋白水平表達(dá)先后上調(diào)。處理6小時之后,隨著NHE1蛋白表達(dá)水平增高,HL-60、Jurkat細(xì)胞pHi升高。經(jīng)NHE1特
4、異性抑制劑卡立泊來德預(yù)處理的細(xì)胞,再用依托泊苷處理24h之后,由于pHi沒有明顯升高,細(xì)胞凋亡率的升高幅度明顯降低。
結(jié)論:Etoposide及放射線照射都能使BCR/ABL陰性的細(xì)胞的NHE1 mRNA轉(zhuǎn)錄增加,NHE1的蛋白表達(dá)上調(diào),誘導(dǎo)出非常明顯的細(xì)胞凋亡,這種細(xì)胞凋亡結(jié)果依賴于NHE1表達(dá)量升高導(dǎo)致的細(xì)胞pHi升高。而這些物理和化學(xué)因素刺激卻不能使BCR/ABL陽性細(xì)胞的NHE1表達(dá)增高,誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用也明顯減
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