奶牛乳腺炎主要病原菌快速診斷及金葡菌α溶血素的原核表達.pdf

1、乳腺炎對奶牛的主要疾病之一，主要由病原微生物感染引起，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經濟損失。目前，缺少針對引起奶牛乳腺炎的主要病原菌的準確而快速的檢測方法；尤其對目前奶牛乳腺炎的主要病原菌缺少分子流行病學資料；國內外還缺少預防奶牛乳腺炎效果較好的疫苗；我國眾多奶牛散養(yǎng)戶在頑固性乳腺炎面前束手無策等等，為探討、解決以上問題，進行了本項研究。本研究分為三部分： 第一部分：奶牛乳腺炎病原菌的分離鑒定對山東省濟南、泰安、臨沂三地區(qū)忠乳腺炎的

2、奶樣進行病原菌分離鑒定。本研究結果表明由葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌引起的乳腺炎仍占主要地位，這對于奶牛乳腺炎的防治具有重要的指導。意義。 第二部分：應用PCR方法快速檢測奶牛乳腺炎主要病原菌將PCR技術應用到奶牛乳腺炎病原菌的檢測中去，建立一種在分子水平快速檢測乳腺炎主要病原菌的方法。根據GenBarlk已發(fā)表的序列設計了三對特異性引物，可同時檢測奶牛乳腺炎的三種主要病原菌：金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，無乳鏈球菌。本方法的特異性為1

3、00％，敏感性檢測的最低濃度為：1.25×10<'3>cfu/ml。與傳統(tǒng)檢測方法相比本試驗所建立的方法具有快速，準確和特異的優(yōu)點。 第三部分：金黃色葡萄球菌α溶血素的原核表達及其生物活性分析α溶血素(Gt-Hemolysin，a-HL)是金黃色葡萄球菌的主要毒力因子之一，利用PCR技術從金黃色葡萄球菌臨床分離株擴增串編碼α溶血素的基因(α-HL)，經克隆篩選和測序鑒定后，構建成該基因的原核表達質粒pET32a<'+>-α-HL