抗奶牛乳腺炎特異性IgY的制備及活性研究.pdf

1、卵黃免疫球蛋白，又稱卵黃抗體，是禽類血清中的IgG進(jìn)入到卵黃中而形成的一類免疫球蛋白。由于雞屬于非哺乳動(dòng)物，與人類親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，因此對(duì)人類的病原體及哺乳動(dòng)物高度保守蛋白質(zhì)能產(chǎn)生強(qiáng)免疫應(yīng)答。這種雞源的特異性多克隆抗體(IgY)選材方便、提取較易、又可規(guī)?；a(chǎn)，在食品及口服被動(dòng)免疫治療領(lǐng)域有著巨大的應(yīng)用前景。 奶牛乳腺炎是奶牛養(yǎng)殖業(yè)中發(fā)病率最高、流行最快、造成損失最大的疾病之一。常用的抗生素防治手段會(huì)造成動(dòng)物體內(nèi)或其產(chǎn)品內(nèi)藥物的殘

2、留和抗藥性或耐藥性的增強(qiáng)，間接危害人類健康。因此尋找一種高效、安全的抗生素替代品不僅必要，而且迫切。 本研究利用奶牛乳腺炎最常見的致病菌：金黃葡萄球菌和大腸桿菌免疫蛋雞，制備出抗上述兩種混合菌的卵黃抗體。通過Bradford法、SDS凝膠電泳、ELISA等手段對(duì)IgY的理化、生化性質(zhì)進(jìn)行了研究。在獲得足量IgY的基礎(chǔ)上，對(duì)奶牛乳腺炎常見致病菌進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)，并與常用抗生素的抑菌能力進(jìn)行比較。得到了以下一些有意義的結(jié)果：

3、 確定了水溶法-二次鹽析-凝膠過濾的提取流程。 針對(duì)抗混合菌卵黃抗體建立了相應(yīng)的ELISA抗體活性檢測(cè)方案，并對(duì)檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。 改進(jìn)了二次鹽析的實(shí)驗(yàn)條件，經(jīng)檢測(cè)抗體活性較傳統(tǒng)方法提高近1.2倍。 采用凝膠過濾柱對(duì)特異性抗體進(jìn)行純化。從曲線趨勢(shì)上看，與標(biāo)準(zhǔn)IgY非常相近，經(jīng)過峰面積的積分計(jì)算，可得特異性IgY的純度達(dá)90﹪以上。經(jīng)過凝膠過濾層析純化后的IgY樣品，再次洗脫得到的目的峰峰型十分對(duì)稱，且無雜質(zhì)峰，

4、可見純化效果很好。 體外抑菌試驗(yàn)表明，IgY在菌濃度為103cfu/ml條件下能在固體平板培養(yǎng)基中顯著抑制兩種菌落的生長(zhǎng)。液體培養(yǎng)基抑菌檢測(cè)，最小抑菌濃度為35mg/ml。 采用K-B紙片法比較IgY與抗生素抑菌能力，結(jié)果顯示，抗單菌的卵黃抗體對(duì)其它菌無交叉抑菌能力，而抗混合菌特異性IgY則對(duì)兩種菌均有顯著的的抑制能力。但I(xiàn)gY抑菌圈平均直徑要小于抗生素抑菌圈4mm左右。 本實(shí)驗(yàn)成功制備出高活性、抗奶牛乳腺炎常見