miR--145靶向FSCN1調(diào)控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探討.pdf

1、分類號——UDC——』II『J㈣㈣㈣㈣『J』』J『』J『』川Y3431982。。。。。。4碩士學(xué)位論文(學(xué)術(shù)型)學(xué)號叢!Q魚主密級——miR145靶向FSCNl調(diào)控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探討緒欣指導(dǎo)教師姓名：塹童塾撞：塹；!：!!盤鱟：姿薟塹劌122QQ窆申請學(xué)位級別：亟學(xué)科專業(yè)名稱：查壹墨塞全生壁芻壟三三堡論文提交日期：2Q!墨主Q魚旦論文答辯日期：2Q!墨圭Q蘭旦2魚旦學(xué)位授予單位：塹劌盤堂學(xué)位授予日期：2Q!墨生Q魚旦3

2、Q望答辯委員會主席：塞9絲鹽整撞2018年06月季li大～m1壩暑TH埸一緒欣m(xù)iR145靶向FSCNl調(diào)控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探討miR145靶向FSCNl調(diào)控奶牛金葡菌型乳腺炎的分子功能初步探討研究生：緒欣指導(dǎo)教師：楊章平教授摘要隨著人們生活水平的日益提高，牛奶早已成為一種非常重要的營養(yǎng)食品，而人們對牛奶品質(zhì)的要求也越來越高。奶牛乳腺炎則是限制牛奶品質(zhì)的一個重要的瓶頸。奶牛乳腺炎通常指的是由于病原微生物的感染而使奶牛乳腺

3、組織產(chǎn)生的炎癥的統(tǒng)稱。乳腺炎的發(fā)生會導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量和乳品質(zhì)的顯著下降，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。本研究采用對金黃色葡萄球菌攻毒乳腺組織及攻PBS組織進行miRNA表達(dá)譜及轉(zhuǎn)錄組測序，篩選出其表達(dá)下調(diào)的miRNA和表達(dá)上調(diào)的目的基因，驗證候選miRNA與免疫基因的靶向關(guān)系及其在乳腺上皮細(xì)胞系中的相關(guān)功能。1miR145在牛乳腺上皮細(xì)胞系(MacT)中的功能研究為探究miR一145在Mac—T中的功能，我們在MacT中過表達(dá)和干擾mi

4、R。145，并檢測其過表達(dá)和干擾效果。效果顯著后應(yīng)用Elisa和E(1U檢測Mac—T幾種細(xì)胞因子的分泌水平變化及細(xì)胞增殖能力變化。結(jié)果顯示：miR一145在牛乳腺上皮細(xì)胞系中過表達(dá)情況下可以顯著降低白細(xì)胞介素12的分泌量和腫瘤壞死因子c【的分泌量，顯著增加干擾素丫的分泌量。與此同時，過表達(dá)miR145后牛乳腺上皮細(xì)胞的增殖能力被抑制。2miR145靶基因的預(yù)測及靶基因FSCNl的識別由金黃色葡萄球菌攻毒的乳腺組織轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)結(jié)果，結(jié)合T

5、argetScan、miRanda以及PicTar三個microRNA靶基因預(yù)測軟件預(yù)測出數(shù)個候選靶基因。并通過實時熒光定量PCR(qRTPCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(WesternBlot)和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)(Luciferase)多重驗證篩選出miR145的靶基因。結(jié)果顯示：miR145過表達(dá)或抑制表達(dá)后，F(xiàn)SCNl的mRNA表達(dá)均發(fā)生顯著變化，并且miR145過表達(dá)可以引起FSCNl蛋白表達(dá)的顯著下調(diào)。FSCNI基因rnRN