SPCT-dot-ELISA的建立及臨床診斷價值評估.pdf

1、立題依據資料表明，由于多種原因，在我國確有不少已肯定能預防的食源性寄生蟲病，如肺吸蟲病、華枝睪吸蟲病、豬(牛)帶絳蟲病、囊蟲病、裂頭蚴病、旋毛蟲病和弓形體病等，在我國部分地區(qū)的城鄉(xiāng)感染嚴重。 目前，對于此類食源性寄生蟲病的診斷技術主要包括病原學檢查、免疫學檢查和分子生物學檢查三個方面。該類疾病難以獲得病原學診斷依據，臨床極易誤診，耽誤病程，造成患者不必要的痛苦和經濟負擔；分子生物學的檢查技術條件要求很高，目前尚僅限于實驗室試用階

2、段；因此，免疫學診斷成為國內外廣大學者關注的焦點，希望能夠研究開發(fā)敏感性高、特異性強、重現性好、操作簡易、反應快速、微量準確和經濟實用的食源性寄生蟲病診斷技術與方法。 斑點酶聯免疫吸附試驗(dot-enzyme-linkedimmunosorbentassay，Dot-ELISA)是近年新發(fā)展的一種ELISA技術，選用對蛋白質有很強吸附能力的硝酸纖維素薄膜作固相載體，底物經酶促反應后形成有色沉淀物使薄膜著色，然后目測或用光密度掃

3、描儀定量分析，該法具有微量、快速、經濟、方便等特點，可用于檢測抗體或抗原，這項技術已廣泛應用于臨床免疫診斷，且能獲得較好的敏感性高、特異性強的檢測結果。 目的:鑒此，本課題旨在根據酶聯免疫吸附試驗的原理，建立SPCT-dot-ELISA，以期獲得較理想的敏感性高、特異性強的寄生蟲病檢測結果，從而為臨床寄生蟲病免疫學診斷和現場應用提供實驗依據。 方法: 1、SPCT-dot-ELISA的建立及靈敏性和特異性指標的檢

4、測制備日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(SEA)、肺吸蟲成蟲可溶性抗原(PwA)、囊蟲抗原(CcA)、旋毛蟲蚴蟲可溶性抗原(TsA)；BCA法測定抗原含量；將四種可溶性抗原包被在同一硝酸纖維素膜；封閉液封閉；加入病原學陽性確診35份及10份陰性待檢血清置4℃冰箱過夜；0.05％PBST第一次洗滌；加辣根過氧化物酶標記的葡萄球菌A蛋白(1：500)室溫孵育2h；0.05％PBST第二次洗滌；加底物顯色。 2、對比試劑盒平行ELISA試驗

5、 用深圳市綠瀚、深圳市博卡ELISA試劑檢測35份病原學確證陽性患者血清及陰性血清。 3、800份臨床樣品試驗 SPCT-dot-ELISA檢測800份臨床樣品，同時比較二種國內主要生產ELISA試劑盒廠商ELISA試劑產品，進行平行試驗，并統計分析。 結果: 1、SPCT-dot-ELISA靈敏性、特異性指標檢測結果 所有質控點均呈藍色，10份日本血吸蟲病患者血清在SEA點均呈藍色，10份

6、肺吸蟲病患者血清在PwA點均呈藍色，10份囊蟲病患者血清在CcA點均呈藍色，5份旋毛蟲病患者血清在TsA點均呈藍色。10份陰性對照血清顯示所有質控點均呈藍色，日本血吸蟲、肺吸蟲、囊蟲和旋毛蟲各標記點無顯色反應。 2、對比試劑盒平行ELISA試驗結果 用深圳市綠瀚、博卡ELISA試劑進行病原學確證陽性患者血清10份日本血吸蟲病、10份肺吸蟲病、10份囊蟲病、5份旋毛蟲病的檢測：除旋毛蟲ELISA法1份綠瀚、博卡是陰性，占2

7、0％，其它均是陽性。10份陰性血清檢測結果：綠瀚試劑旋毛蟲2份弱陽性，占40％，其它均為陰性；博卡試劑血吸蟲1份陽性，占10％，旋毛蟲1份陽性，占20％，其它均為陰性。 3、800份臨床檢測樣品檢測結果 SPCT-dot-ELISA檢測CcA7例陽性(4例符合)、TsA15例陽性(12例符合)，SEA、PwA為陰性。綠瀚800例中88例陽性，博卡462例陽性；其中肺吸蟲中綠瀚16例陽性，博卡52例；囊蟲中綠瀚3例陽性，博

8、卡169例；旋毛蟲綠瀚35例陽性，博卡111例陽性；肝吸蟲和血吸蟲相似，綠瀚檢測陽性分別為20和21例，博卡檢測陽性123例和71例。 結論:本實驗較成功的建立了SPCT-dot-ELISA，該法具有如下特點： 1、檢測范圍廣：能同時檢測血吸蟲病、肺吸蟲病、囊蟲病、旋毛蟲病4種寄生蟲病患者血清中的特異抗體。 2、陽性檢出率高：經病原學確證的陽性血清采用該法陽性檢出率為100％。 3、交叉反應率低：肺吸蟲與