一種新型多肽抑制眼部新生血管的研究.pdf

1、研究目的：1.從人胎盤生長(zhǎng)因子-1(human placental growth factor-1,P1GF-1)中篩選出可能具有抑制新生血管活性的多肽;2.通過(guò)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)篩選出的多肽是否具有抑制新生血管的作用;3.初步探索多肽發(fā)揮抑制新生血管作用的可能機(jī)制;4.通過(guò)功能學(xué)和組織形態(tài)學(xué)方法對(duì)篩選出的多肽進(jìn)行生物安全性檢測(cè),為今后治療新生血管相關(guān)性眼病的藥物開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　研究?jī)?nèi)容和方法：
　　1.根據(jù)P1

2、GF-1與其受體:血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-1(vascular endothelial growth factor receptor-1,VEGFR-1)結(jié)合的關(guān)鍵部位從人PIGF-1中篩選可能具有抑制新生血管活性的氨基酸片段,通過(guò)固相合成法合成相應(yīng)的多肽,并用高效液相色譜(high-performance liquid chromatography,HPLC)和質(zhì)譜分析(mass spectrometry,MS)對(duì)所合成多肽進(jìn)行鑒定

3、。
　　2.利用MTS方法、改良Boyden小室系統(tǒng)及Matrigel基質(zhì)膠系統(tǒng)檢測(cè)多肽對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)增殖、遷移和管腔形成的干預(yù)作用;
　　3.研究多肽對(duì)雞胚尿囊膜(CAM)模型、小鼠角膜微囊袋模型、氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜病變(Oxygen-Induced Retinopathy)模型以及裸鼠腫瘤模型中新生血管的抑制作用;4.利用

4、競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ELISA法、Western Blotting技術(shù)初步探討多肽抑制新生血管活性的可能機(jī)制;5.利用電生理技術(shù)、組織病理切片以及透射電鏡等方法觀察多肽對(duì)小鼠視網(wǎng)膜潛在的毒性作用。
　　研究結(jié)果：從人P1GF-1中篩選出一段可能具有抗新生血管活性的多肽,命名為ZY1,MW:2221.66 Da。多肽ZY1對(duì)HUVECs細(xì)胞作用后能夠有效抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)的細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成,與VEGF組之間具有顯著

5、差異(P＜0.05),且多肽ZY1對(duì)HUVECs無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用。多肽ZY1能有效抑制雞胚尿囊膜血管生成、小鼠角膜新生血管、小鼠視網(wǎng)膜新生血管、以及裸鼠腫瘤新生血管的生成,與對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。多肽ZY1能與PIGF及VEGF競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合受體VEGFR-1,并且抑制VEGFR-1/ERK/AKT活化(P＜0.05)。玻璃體注射多肽ZY1后小鼠視網(wǎng)膜功能及形態(tài)學(xué)未發(fā)現(xiàn)明顯改變(P＞0.05)。
　　結(jié)論：1.多肽