一種新型抗VEGF靶向制劑的抗腫瘤血管生成作用機(jī)制研究.pdf

1、血管生成是腫瘤多步驟多階段發(fā)展過程中的八大標(biāo)志之一，是腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的先決條件。腫瘤的血管生成過程是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程，包括血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、出芽和遷移等。與正常組織一樣，腫瘤依靠血管網(wǎng)絡(luò)來實現(xiàn)對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排泄。在眾多調(diào)控血管生成的內(nèi)源性因子中，血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是目前研究最為徹底的一個。VEGF在胚胎發(fā)育和腫瘤的新生血管生成

2、中起到了關(guān)鍵的作用。VEGF主要通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，保持血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整和存活中發(fā)揮作用，是目前已知的唯一一個在腫瘤的整個生命周期中均有持續(xù)表達(dá)的血管生長因子?；谏鲜鲅芯孔C據(jù)，VEGF被認(rèn)為是抗腫瘤血管生成的一個理想的治療靶點(diǎn)。
　　 前期研究中我們成功克隆了靶向VEGF的FP3。FP3是一個靶向VEGF的全人源化的可溶性受體蛋白。它的結(jié)構(gòu)包括了VEGFR1(Flt-1)的第二個胞外區(qū)域和VEGFR2(Flk-

3、1，KDR)的第三、四個胞外區(qū)域，將這些區(qū)域與人免疫球蛋白1(IgG1)的Fc片段基因融合構(gòu)建融合蛋白。本課題旨在通過體外細(xì)胞實驗和體內(nèi)裸鼠腫瘤模型研究FP3治療結(jié)腸癌的作用，并初步探索其內(nèi)在的作用機(jī)制。
　　 具體研究內(nèi)容如下：
　　 體外研究部分：MTT法檢測FP3對體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞系的增殖能力改變情況；劃痕試驗檢測FP3對血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響；血管內(nèi)皮細(xì)胞微管形成試驗檢測FP3對血管形成的影響；大鼠動脈

4、環(huán)出芽試驗檢測FP3對動脈環(huán)微血管出芽情況的作用；雞胚尿囊膜試驗檢測FP3對血管生成的影響。
　　 體內(nèi)研究部分：采用LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞株裸鼠皮下移植瘤模型研究FP3的體內(nèi)治療結(jié)腸癌的作用和機(jī)制。通過定期測量各組瘤體體積，確定FP3對移植瘤有無抑制作用；治療結(jié)束后，對各組瘤組織用免疫組織化學(xué)的方法比較各組瘤體內(nèi)微血管密度來揭示瘤內(nèi)血管生成狀況，瘤內(nèi)細(xì)胞增殖情況。
　　 研究結(jié)果：
　　 體外研究結(jié)果顯示：FP3能

5、抑制VEGF誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞系HUVECs的增殖、遷移和微血管形成，并能抑制VEGF誘導(dǎo)的大鼠動脈環(huán)出芽和MCF-7乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)的雞胚尿囊膜血管的生長。體內(nèi)研究結(jié)果顯示：FP3能明顯抑制LoVo結(jié)腸癌細(xì)胞株移植瘤的生長和明顯抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，明顯降低瘤內(nèi)微血管密度，并且降低了結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖能力。
　　 結(jié)論：體外細(xì)胞系研究和裸鼠體內(nèi)腫瘤模型研究表明，新型抗血管藥物FP3具有明顯的體外和體內(nèi)抗血管生成作用和體內(nèi)抗腫瘤作用，