輔助生殖與小鼠生物凈化及雄性不育品系的挽救.pdf

1、輔助生殖技術是指采用輔助手段使不孕或不育動物（包括人）成功妊娠產子的技術，臨床主要運用于不孕不育的治療，動物中主要用于生物凈化或生殖生物學研究。輔助生殖技術包括超排、人工受精、體外受精、胚胎移植等各類衍生技術。我們通過輔助生殖技術對非SPF小鼠進行了生物凈化，并對某些雄性不育品系進行挽救，本研究共分為兩個部分。
　　實驗一：采用剖宮產取胎和輔助生殖技術對引進小鼠進行生物凈化。針對具有正常繁殖能力的小鼠品系，通過陰道栓的檢查和觸診確

2、定剖宮產取胎時間，采用子宮摘除取手術對小鼠進行剖宮產取胎，取出仔鼠進行代乳，觀察代乳情況及代乳仔鼠成活率；對于繁殖力較差或者喪失繁殖能力的品系，采取輔助生殖的方式，采集小鼠精子和卵子，在HTF液中受精，培養(yǎng)后3.5天移植到SPF級受體母鼠子宮內，待產子。兩種方式凈化的小鼠斷奶后送檢，均達到SPF級。
　　實驗二：將圓形精子細胞注射到哺乳動物卵母細胞中可產生新的胚胎和子代。然而，現(xiàn)仍有一些技術困難存在，特別是圓形精子細胞的識別承擔著

3、ROSI的發(fā)展。我們的研究是利用相差顯微鏡（PCM）和流式細胞分選儀（FACS）從睪丸細胞中挑選出圓形精子，對三個品系的小鼠進行ROSI。在所有的品系中受精率，胚胎的發(fā)育和子代的獲得均無顯著差異；PCM和流式細胞儀篩選出的圓形精子細胞均可有效地挽救不育品系pten KO小鼠。
　　我們研究發(fā)現(xiàn)，對微生物級別達不到SPF級但不含垂直傳播病原體的小鼠，采用兩種方式均可有效提高小鼠的微生物等級。另外，ROSI實驗結果表明，通過流式細胞儀