菌核凈的免疫檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、菌核凈(Dimethachlon)是一種亞胺類新型高效低毒殺菌劑，對(duì)于油菜菌核病、煙草赤腥病、水稻紋枯病等具有良好的防效作用，目前尚缺乏靈敏、快速、經(jīng)濟(jì)的殘留檢測(cè)方法。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)是對(duì)農(nóng)藥及其代謝物的重要的快速分析方法，靈敏度高，特異性強(qiáng)。本論文利用菌核凈多克隆抗體進(jìn)行了免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究，主要研究結(jié)果如下： 1．對(duì)菌核凈的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，通過三步反應(yīng)在菌核凈分子上引入-CO(CH<,2>)<,3>COOH活性基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成了模

2、擬菌核凈特征結(jié)構(gòu)的半抗原菌核凈-2-戊二酸半酯；利用活性酯法(DCC法)對(duì)半抗原與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，通過紫外掃描法和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳證明成功合成了人工抗原。 2．以菌核凈半抗原與牛血清蛋白(BSA)的偶聯(lián)物作為免疫原免疫新西蘭大白兔，獲得了抗菌核凈的多克隆抗體。制備的抗血清效價(jià)達(dá)1∶512000，經(jīng)方陣滴定法和間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA法確定了包被尿和抗血清的工作濃度：包被原稀釋度為1∶1000(2μg/mL)，血清稀釋度為

3、1∶128000。 3．建立了菌核凈間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA(IC-ELISA)檢測(cè)方法，優(yōu)化了檢測(cè)條件。對(duì)菌核凈的半數(shù)抑制濃度(I<,50>)為2.83μg/mL，最低檢測(cè)濃度(I<,10>)為0.011μg/mL，線性檢測(cè)范圍為0.044-25.00μg/mL?？贵w對(duì)甲醇有一定耐受力，待測(cè)樣品中甲醇含量不宜超過10％；磷酸鹽緩沖液在近中性條件下，ELISA有較高的檢測(cè)靈敏度。對(duì)煙葉中的菌核凈進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，IC-ELISA檢測(cè)的