江浙蝮蛇毒誘導(dǎo)人滑膜細(xì)胞增殖和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:以RA(rheumatoid arthritis，RA)滑膜細(xì)胞模型研究江浙蝮蛇毒(Agkistrodon halys Pallas venom，AHV)對滑膜細(xì)胞增殖和凋亡的作用，并探討其可能的作用機(jī)制，為蝮蛇蛇毒治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎提供相關(guān)理論依據(jù)。
　　 方法:采用胰蛋白酶消化法分離純化類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜細(xì)胞，傳代培養(yǎng)。采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測體外AHV對滑膜細(xì)胞增殖的抑制作用；用熒光顯微鏡觀察以及流式細(xì)胞儀

2、(FCM)分析檢測AHV對滑膜細(xì)胞凋亡的影響；同時用比色法和Western blotting法分析AVH對凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3和bcl-2表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:體外MTT檢測結(jié)果顯示AHV對滑膜細(xì)胞呈劑量依賴和時間依賴的抑制作用。凋亡檢測(包括熒光顯微鏡觀察以及流式細(xì)胞儀分析)表明AHV可顯著引起滑膜細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步比色法分析發(fā)現(xiàn)AHV作用24 h可激活滑膜細(xì)胞裂解液中Caspase-3的活性，而Western b