CIK細(xì)胞對A549人肺癌細(xì)胞株的抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用的研究.pdf

1、目的:研究多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)對A549肺癌細(xì)胞株的抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用MTT法檢測CIK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞株的抗增殖作用的影響及細(xì)胞毒活性；通過倒置顯微鏡、透射電鏡、AO/EB熒光染色觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變；應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶﹙TdT﹚介導(dǎo)的脫氧核苷酸缺口末端標(biāo)記﹙TUNEL﹚法檢測CIK細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的情況；通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測 A549細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因 p53、F

2、as、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白 Ki-67的陽性表達(dá)率，以探討其在誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　結(jié)果：
　　(1)MTT比色法表明隨著CIK細(xì)胞與肺癌細(xì)胞效靶比增加及作用時(shí)間延長，抑制率明顯增強(qiáng)。同一作用時(shí)間不同效靶比之間有顯著性差異，不同作用時(shí)間同一效靶比之間也有顯著性差異；
　　(2)倒置顯微鏡觀察：CIK細(xì)胞向靶細(xì)胞方向靠近，形成典型的玫

3、瑰花環(huán)狀改變。腫瘤細(xì)胞胞漿出現(xiàn)顆粒狀物，有的CIK細(xì)胞游入肺癌細(xì)胞質(zhì)或胞核內(nèi)殺傷腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞數(shù)明顯減少，對照組肺癌細(xì)胞生長良好；
　　(3)HE染色：CIK實(shí)驗(yàn)組同倒置顯微鏡下所見；
　?。?）透射電鏡觀察結(jié)果：在效靶細(xì)胞混合培養(yǎng)5小時(shí)和14小時(shí)后，多數(shù)靶細(xì)胞內(nèi)可見到染色質(zhì)濃縮，核仁分解，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡，凋亡小體形成。在效靶細(xì)胞共育24小時(shí)后，絕大多數(shù)靶細(xì)胞死亡，死亡方式有細(xì)胞凋亡及溶解壞死兩種；
　　（5）AO

4、/EB熒光染色觀察：實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞減少，凋亡細(xì)胞增多，細(xì)胞體積縮小，部分細(xì)胞核破裂；
　?。?）TUNEL法檢測結(jié)果：效靶細(xì)胞混合培養(yǎng)后，起初隨時(shí)間延長凋亡細(xì)胞逐漸增多，5－14小時(shí)凋亡率明顯上升，14－24小時(shí)凋亡率下降；
　?。?）免疫細(xì)胞化學(xué)染色的結(jié)果表明：CIK實(shí)驗(yàn)組p53、Ki-67、survivin蛋白隨作用時(shí)間的延長而均下降，F(xiàn)as、caspase-3,caspase-8,caspase-9蛋白表達(dá)上調(diào)，與對照

5、組相比較均有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1．CIK細(xì)胞對A549肺癌細(xì)胞具有抗增殖及誘導(dǎo)凋亡作用。
　　2．CIK細(xì)胞對A549肺癌細(xì)胞的抗增殖作用機(jī)制可能與下調(diào)Ki-67蛋白的表達(dá)，使癌細(xì)胞處于靜止期有關(guān)。
　　3．CIK細(xì)胞對A549肺癌細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用機(jī)制可能與下調(diào)p53、survivin蛋白的表達(dá),上調(diào)Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9蛋白的表達(dá)有關(guān),經(jīng)由細(xì)胞凋亡的死亡