有機(jī)分析試劑與蛋白質(zhì)顯色反應(yīng)及其應(yīng)用研究.pdf

1、本文在查閱大量關(guān)于染料與蛋白質(zhì)作用的文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，提出了用對(duì)-二甲胺基亞芐羅丹寧(p-DBR)、對(duì)-氯酚偶氮羅丹寧(CPARH)、4-(2-噻唑偶氮)-1，3-二羥基萘(TADNm)、-2'-苯并噻唑偶氮-1，8-二羥基-3，6-萘二磺酸(BTAC)等測(cè)定蛋白質(zhì)的方法。主要研究?jī)?nèi)容： 1.研究了蛋白質(zhì)與p-DBR的結(jié)合反應(yīng)，HSA濃度在3.6×10-8mol·L-1～1.0×10-7mol·L-1范圍內(nèi)，該反應(yīng)符合Pesavent

2、o模式。反應(yīng)的最佳條件為pH8.0，7.0×10-5mol·L-1p-DBR，1.25×10-4mol·L-1CTMAB，室溫顯色15min。在該條件下，HSA與p-DBR生成橙黃色復(fù)合物，最大吸收波長(zhǎng)在480nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為3.4×106L·mol-1·cm-1。該方法可用來測(cè)定生物樣品中的蛋白質(zhì)，線性范圍為1.2mg·L-1～11.0mg·L-1，最低檢測(cè)限為0.42mg·L-1，回收率為95％～102％。 2.研究

3、了蛋白質(zhì)與CPARH的結(jié)合反應(yīng)。反應(yīng)的最適條件為：pH4.0，2.0×10-4mol·L-1CPARH，5.0×10-5mol·L-1CTMAB，室溫顯色15min。在此條件下，HSA與CPARH生成橙黃色復(fù)合物，最大吸收波長(zhǎng)為460nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為4.7×105L·mol-1·cm-1。利用該體系可測(cè)定蛋白質(zhì)，線性范圍為12.0mg·L-1～96.0mg·L-1。 3.研究了蛋白質(zhì)與TADNm的結(jié)合反應(yīng)。該反應(yīng)在HSA

4、濃度為3·6×10-7mol·L-1～8.1×10-7mol·L-1范圍，符合Pesavento模式，最大結(jié)合數(shù)為212。顯色反應(yīng)的最適條件為pH5.0，1.5×10-4mol·L-1TADNm，0.0050％TritonX-100，室溫顯色10min。HSA與TADNm生成橙紅色復(fù)合物，最大吸收波長(zhǎng)在500nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為5.1×105L·mol-1·cm-1。用HSA-TADNm復(fù)合物測(cè)定血清等生物樣品中蛋白質(zhì)時(shí)，線性范圍為

5、12.0mg·L-1～48.0mg·L-1，最低檢測(cè)限為2.1mg·L-1。 4.研究了蛋白質(zhì)與BTAC的結(jié)合反應(yīng)。該反應(yīng)的最適條件為pH4.0，1.25×10-4mol·L-1BTAC，室溫顯色15min。HSA-BTAC復(fù)合物為紫紅色，最大吸收波長(zhǎng)為580nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為2.7×105L·mol-1·cm-1。該方法可用來測(cè)定生物樣品中的蛋白質(zhì)，線性范圍為48.0mg·L-1～120.0mg·L-1，最低檢測(cè)限為8.