蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)

1、實(shí)驗(yàn) 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng),一、目的,二、原理,蛋白質(zhì)分子中的某種或某些基團(tuán)與顯色劑作用，可產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)，不同蛋白質(zhì)所含氨基酸不完全相同，顏色反應(yīng)亦不同。顏色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)的專一反應(yīng)，一些非蛋白物質(zhì)亦可產(chǎn)生相同顏色反應(yīng)，因此不能僅根據(jù)顏色,掌握鑒定蛋白質(zhì)的原理和方法。,反應(yīng)的結(jié)果決定被測物是否是蛋白質(zhì)。顏色反應(yīng)是一些常用的蛋白質(zhì)定性和定量測定的依據(jù)。重要的顏色反應(yīng)有：,1.雙縮脲反應(yīng) 將尿素加熱到180℃，則兩分子尿素縮合

2、成一分子雙縮脲，并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中能與硫酸銅反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有許多和雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能起雙縮脲反應(yīng)。通?？捎么朔磻?yīng)來定性鑒定蛋白質(zhì)，也可根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)生的顏色在540nm處比色，定量測定蛋白質(zhì)。,2.蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng) 是含有芳香族氨基酸特別是含有酪氨酸和色氨酸的蛋白質(zhì)所特有的呈色反應(yīng)。蛋白質(zhì)溶液遇硝酸后，先產(chǎn)生白色沉淀，加熱則白色沉淀變成黃色，再加堿顏色加深呈橙黃色

3、，這是因?yàn)橄跛釋⒌鞍踪|(zhì)分子中的苯環(huán)硝化，產(chǎn)生了黃色硝基苯衍生物。例如皮膚、指甲和毛發(fā)等遇濃硝酸會(huì)變成黃色。3.米倫反應(yīng) 米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物，蛋白質(zhì)溶液加入米倫試劑后即產(chǎn)生白色沉淀，加熱后沉淀變成紅色。,酚類化合物有此反應(yīng)，酪氨酸含有酚基，故酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白質(zhì)都有此反應(yīng)。4.茚三酮反應(yīng) 蛋白質(zhì)與茚三酮共熱，則產(chǎn)生藍(lán)紫色的還原茚三酮、茚三酮和氨的縮合物。此反應(yīng)為一切氨基酸及α-氨基酸

4、所共有。含有氨基的其他物質(zhì)亦呈此反應(yīng)。,三、操作：,1.雙縮脲反應(yīng)①取少許結(jié)晶尿素放在干燥試管中，微火加熱，尿素溶化并形成雙縮脲，釋出的氨可用,紅色石蕊試紙?jiān)囍?。至試管?nèi)有白色固體出現(xiàn)，停止加熱，冷卻。然后加10%NaOH 溶液1mL 混勻，觀察有無紫色出現(xiàn)。②另取一試管，加蛋白質(zhì)溶液10滴，再加10% NaOH 溶液10滴及1%CuSO4溶液4滴，混勻，觀察是否出現(xiàn)紫玫瑰色。2.蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng) 在一試管內(nèi)，加蛋白質(zhì)溶液1

5、0滴及濃硝酸3～4滴，加熱，冷卻后再加10%NaOH 溶液5滴，觀察顏色反應(yīng)。3.米倫反應(yīng)① 用苯酚做實(shí)驗(yàn)：取0.5%苯酚溶液1mL 于,試管中，加米倫試劑約0.5mL，小心加熱，溶液即出現(xiàn)玫瑰紅色。② 用蛋白質(zhì)溶液做實(shí)驗(yàn)：取2mL 蛋白質(zhì)溶液，加0.5mL 米倫試劑，此時(shí)出現(xiàn)蛋白質(zhì)的沉淀(因試劑含汞鹽及硝酸之故)，小心加熱，凝固之蛋白質(zhì)出現(xiàn)紅色。4.茚三酮反應(yīng) 取1mL 蛋白質(zhì)溶液置于試管中，加0.5mL茚三酮試劑，加