ATRA對人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞VEGF及其受體表達(dá)的影響.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文ATRA對人結(jié)直腸癌LoVo細(xì)胞VEGF及其受體表達(dá)的影響姓名：黃江龍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：衛(wèi)洪波20070520中山大學(xué)碩十學(xué)位論文ATIRA對人結(jié)直腸癌LsVo細(xì)胞VEGF及其受體表選的影響釋放VEGF，或阻斷其受體表達(dá)有可能顯著抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。維甲酸(refinoicacid，RA)3t稱視黃酸或維生素A酸，是維生素A的衍生物。其中最重要的是全反式維甲酸(ATRA)。與其它類固醇激素一樣

2、，機(jī)體內(nèi)一定濃度的維甲酸可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、成熟、免疫及毒性物質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是機(jī)體正常生長發(fā)育和各種生理活動必不可少的重要因子。維甲酸還可誘導(dǎo)自血病細(xì)胞株(HE60)細(xì)胞或原代培養(yǎng)的急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)細(xì)胞向成熟分化，并已成為治療APL的經(jīng)典藥物。在宮頸癌、皮膚鱗狀細(xì)胞癌的病人使用維甲酸能達(dá)到很好的療效。新近的實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察表明，維甲酸還有抑制VEGF、下調(diào)微血管密度的作用。本課題的目的是研究全反式維甲酸(ATRA)對人結(jié)

3、直腸癌LoVo細(xì)胞株表達(dá)VEGF和其受體的影響，為全反式維甲酸治療結(jié)直腸癌提供理論依據(jù)。方法與結(jié)果一：應(yīng)用ELISA法檢測Lovo細(xì)胞分泌VEGF的情況：實(shí)驗(yàn)方法：將培養(yǎng)至80％融合的LoVo細(xì)胞消化制成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1106／ml，按每孔01ml(1x10’)接種于A、B、c3個6孔板上；每板分為5組：空白對照組(不含全反式維甲酸或無水乙醇)、10。5mol／L全反式維甲酸組、10’6moI／L全反式維甲酸組、10

4、。7mol／L全反式維甲酸組、102mol／L無永乙醇組。并作3個相應(yīng)的復(fù)板。常規(guī)培養(yǎng)至指數(shù)生長期時，空白對照組加以同等量的RPMI1640繼續(xù)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組(104mol／L全反式維甲酸組、10‘mol／L全反式維甲酸組、100moI／L全反式維甲酸組、102moI／L無水乙醇組)分別換用含相應(yīng)濃度藥物的RPMI一1640的溶液進(jìn)行培養(yǎng)。取不同藥物不同時闖作用的5106個細(xì)胞，培養(yǎng)體系為5ml，于37”C、5％C0。飽和溫度的培養(yǎng)箱中培

5、養(yǎng)485，然后2000r／min離心8～10min，收集培養(yǎng)上清液，然后進(jìn)行E1isa實(shí)驗(yàn)，檢查上清液中VEGF含量，按照試劑盒測試步驟進(jìn)行。每個細(xì)胞上清液樣本皆行正副2個測試孔，壤后取平均0D值。然后酶聯(lián)儀檢測450nm波長的吸光度值(OD值)，結(jié)果輸入SPSSll0forWindows軟件，應(yīng)用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)的方差分析(TowWayANOVA)對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，并繪制不同濃度全反式維甲酸作用于LoVo細(xì)胞24h、48h、72h細(xì)胞VEG