成都地區(qū)獻血人群RhD陰性個體遺傳學背景研究.pdf

1、目的:
　　 研究成都地區(qū)RhD初篩陰性獻血者中D變異體的存在情況,重點探索Del型這類極弱D的分子遺傳學背景,以及各種變異D獻血者可能的篩查策略。
　　 方法:
　　 2009年6月-2009年11月之間采集74,947份全血中獲得318份鹽水法初篩陰性標本,采用間接抗球蛋白試驗(IAT)篩選部分D和弱D,對IAT陰性的標本采用吸收放散試驗,篩查Del型,采用序列特異性引物PCR(sequence-speici

2、ficprimer-polymerase chain reactions,PCR-SSP)檢測各種變異D基因型。吸收放散試驗陽性標本采用Del DNA分型試劑盒檢測Del等位基因,該試劑盒檢測的Del等位基因包括RHD(M285)、RHD(IVS3+1)、RHD(IVSl+1)、RHD(1227A)、RHD(DELEX9)、RHD(M1I)、RHD(R10W)、RHD(L84P)。對無法確定為上述已知Del型的樣本進行RHD基因1-7和

3、9-10外顯子測定,以便了解其外顯子的存在情況。對檢測到的弱D15型、RHD(227A)和RHD(M1I)變異D類型進行測序確認,以及疑難標本進行測序分析。
　　 結(jié)果:
　　 318例鹽水法初篩陰性標本中檢出3例IAT陽性樣本,其中2例是弱D15,1例是部分D(RhDVIⅢ)。成都地區(qū)獻血人群中RhDIAT陰性的比例為0.42％。315例IAT陰性標本中ccee表型(56.19％)和Ccee表型(32.06％)比例高。

4、303例IAT陰性標本吸收放散試驗,發(fā)現(xiàn)71例陽性。通過Del DNA分型試劑盒檢測,檢出57例RHD(1227A)型、1例RHD(M1I)型、13例無法確定為已知Del型。13例無法確定為已知Del型的樣本檢測RHD基因1-7和9-10外顯子,發(fā)現(xiàn)11例樣本大部分或全部缺失上述外顯子、2例含有全部上述外顯子。34例吸收放散實驗陰性且含有C或E抗原的標本,經(jīng)檢測RHD基因1-7和9-10外顯子及1227A,發(fā)現(xiàn)9例RHD(7227A)型

5、、25例部分或全部缺失型。測序確認了弱D15型、RHD(M1I)和RHD(1227A)突變位點,對2例含有所有外顯子的標本進行1-10外顯子測序未發(fā)現(xiàn)突變位點。通過血清學試驗和分子生物學試驗,我們確定了Del型69例,占IAT篩查RhI)陰性的22.77％(69/303)。
　　 結(jié)論:
　　 成都地區(qū)常規(guī)血清學篩查RhD陰性獻血人群中存在多種D變異體。其中Del型最多。檢測到的Del型中,DelRHD(1227G>A)