模擬失重對比目魚肌凋亡的影響及藥物干預(yù)研究.pdf

1、背景與目的：失重條件下為適應(yīng)環(huán)境，人和動(dòng)物生理狀態(tài)會發(fā)生一系列的變化，其中以骨骼肌萎縮最為顯著。目前其發(fā)生的機(jī)制仍不明確且缺少特效的干預(yù)措施。因此，探討肌肉萎縮的發(fā)生機(jī)制對肌萎縮的防治具有重要的意義。PI3K/AKT通路和MAPK通路是膜受體感受外界刺激后向胞內(nèi)傳導(dǎo)信號的主要途徑，也是調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、衰老和凋亡的關(guān)鍵信號途徑。研究表明上述信號途徑可能參與失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的發(fā)生機(jī)制。本研究選用血府逐瘀膠囊和丁苯酞兩種藥物，以尾部懸

2、吊為模擬失重模型，對模擬失重狀態(tài)下骨骼肌的形態(tài)學(xué)及PI3K/AKT通路和MAPK通路相關(guān)蛋白和基因轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行研究，以期尋找有效的失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的干預(yù)藥物。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：建立尾部懸吊大鼠模擬失重模型，40只同源雌性SD大鼠(10周齡，200-250g)隨機(jī)分為對照組(CON)，尾吊組(SUS)，尾吊+血府逐瘀膠囊組(XFZY)，尾吊+丁苯酞組(NBP)。尾吊30天，對照組及尾吊組單純給予溶媒，血府逐瘀膠囊組劑量為2

3、5mg/kg.d，丁苯酞組劑量為20mg/kg.d，各組均每日上午八點(diǎn)灌胃一次。
　　 (1)通過測量比目魚肌濕重體質(zhì)量比，橫截面積，mATP酶染色，觀察形態(tài)學(xué)變化。
　　 (2)應(yīng)用Western-blot及RT-PCR檢測技術(shù)分析PI3K/AKT及MAPK通路中ERK、JNK通路相關(guān)蛋白及下游分子BAX、Cyto-c蛋白及轉(zhuǎn)錄水平變化。
　　 (3)分別利用紫外分光光度計(jì)和TUNEL方法檢測caspase-3

4、活性和比目魚肌纖維細(xì)胞凋亡程度。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：40只大鼠全部進(jìn)入結(jié)果分析，無脫失。
　　 (1)與對照組相比，尾吊組比目魚肌濕重體質(zhì)量比下降了56.39％。血府逐瘀組和丁苯酞組平均濕重體質(zhì)量比分別較單純尾吊組增加了14.49%和13.85%。血府逐瘀膠囊組與尾吊組差異達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。尾吊30天后，與對照組相比，其余三組Ⅰ型纖維比例明顯減少，而藥物干預(yù)后并未改善Ⅰ型纖維向Ⅱ纖維的轉(zhuǎn)換。
　　 (2)尾吊30天

5、顯著抑制了PI3K/AKT信號通路中PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，增強(qiáng)了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)。血府逐瘀膠囊組干預(yù)后提高了PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)，其中對關(guān)鍵分子P-AKT的表達(dá)影響最大，與單純尾吊組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。丁苯酞組干預(yù)后，也提高了P-AKT、GRP78蛋白及轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)，但丁苯酞對GRP78的蛋白及轉(zhuǎn)錄

6、水平影響最大。
　　 (3)尾吊30天，抑制了ERK細(xì)胞保護(hù)通路中P-ERK的蛋白表達(dá)，同時(shí)增強(qiáng)了促凋亡的JNK通路中P-JNK蛋白表達(dá)，兩種藥物干預(yù)后可從兩方面檢測到保護(hù)作用，并且血府逐瘀膠囊保護(hù)作用優(yōu)于丁苯酞組。
　　 (4)尾吊30天比目魚肌caspase3酶活性顯著增強(qiáng)，肌纖維細(xì)胞凋亡增加，藥物干預(yù)后caspase3酶活性較尾吊組顯著降低，凋亡細(xì)胞減少，但仍高于對照組。
　　 結(jié)論：
　　 (1)