模擬失重肺組織蛋白組學變化和藥物干預對一氧化氮表達及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 失重會使肺功能受到影響，并可導致一定程度肺組織損傷。本實驗采用大鼠尾懸吊模擬失重的方法，研究模擬失重后大鼠肺組織蛋白組學變化情況，深入了解失重所致肺損傷的發(fā)生機制；同時選擇N-乙酰半胱氨酸和銀杏葉提取物進行藥物干預，觀察大鼠肺組織細胞凋亡和一氧化氮表達情況的變化，為失重所致肺損傷的藥物防護提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.蛋白組學研究：選擇健康雄性S-D大鼠20只，體重180-220g，隨機分

2、為模擬失重7天和正常對照2組，采用尾懸吊-30°作為模擬失重模型。尾懸吊結(jié)束時，用10％水合氯醛(30ml/kg)腹腔注射麻醉后，打開胸腔取出肺組織并提取肺組織蛋白，蛋白提取后采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)建立差異表達圖譜，通過凝膠成像分析和人工比對，確定差異蛋白質(zhì)斑點，然后對每個差異蛋白點進行膠內(nèi)酶切，采用HDMS進行液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索鑒定蛋白質(zhì)。最后對差異蛋白的生物學功能進行較為詳細的了解和分類，進一步

3、深入研究它們的功能。
　　 2.藥物干預研究：選擇健康雄性S—D大鼠40只，體重180-220g，隨機分為模擬失重7天、正常對照、N-乙酰半胱氨酸干預和銀杏葉提取物干預4組，采用尾懸吊-30°作為模擬失重模型。尾懸吊結(jié)束時，用10％水合氯醛(30ml/kg)腹腔注射麻醉后，打開胸腔取出肺組織制作石蠟切片。采用原位細胞凋亡檢測法、免疫組織化學法和原位雜交法分別觀察大鼠肺組織細胞凋亡、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)和bcl-2、ba

4、x及iNOS mRNA的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.蛋白組學變化：應(yīng)用2-DE對懸吊組和對照組大鼠肺組織樣品進行分離和對比，建立差異表達圖譜，通過凝膠成像分析和人工比對，確定差異蛋白質(zhì)斑點17個，其中13個上調(diào)，3個下調(diào)，1個消失。這些點分布在等電點4.65-8.61、分子量15972-60317范圍內(nèi)，最大表達上調(diào)6.9倍，下調(diào)最低至0.1倍。經(jīng)膠內(nèi)酶切和質(zhì)譜鑒定，共鑒定出17種蛋白質(zhì)，其中13種上調(diào)，3種下調(diào)，1

5、種消失，與細胞代謝相關(guān)的5個，與細胞功能相關(guān)的4個，與細胞結(jié)構(gòu)蛋白相關(guān)的3個，與蛋白降解系統(tǒng)相關(guān)的2個，與信號傳導相關(guān)的3個。它們可能與細胞能量代謝、應(yīng)激與炎癥反應(yīng)、細胞損傷與修復、細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導和其它細胞功能活動有關(guān)，在細胞免疫應(yīng)答、細胞凋亡等方面起著重要的作用。
　　 2.藥物干預結(jié)果：懸吊組大鼠肺組織細胞凋亡指數(shù)(23.1％±2.6％)明顯高于正常對照組(2.2％±1.1％)(P<0.05)，而N-乙酰半胱氨酸干預組大鼠肺

6、組織細胞凋亡指數(shù)(7.5％±1.6％)顯著低于尾懸吊組(P<0.05)，大鼠肺組織bcl-2/baxmRNA的表達也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。懸吊組大鼠肺組織iNOS表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，而N乙酰半胱氨酸干預組大鼠肺組織iNOS表達水平明顯低于7天懸吊組(P<0.05)，大鼠肺組織iNOS mRNA表達也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。同樣，銀杏葉提取物干預組大鼠肺組織細胞凋亡指數(shù)(8.1％±1.7％)顯著低于尾懸吊

7、組(P<0.05)，其bcl-2/baxmRNA的表達也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。而且銀杏葉提取物干預組大鼠肺組織iNOS表達水平也明顯低于7天懸吊組(P<0.05)，其iNOS mRNA表達也有相應(yīng)的變化(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 模擬失重后大鼠肺組織蛋白組學發(fā)生變化，有些蛋白表達上調(diào)，而有些蛋白表達下調(diào)甚至消失，影響細胞能量代謝、應(yīng)激與炎癥反應(yīng)、細胞損傷與修復以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導等細胞功能活動，在失重所