外源性谷氨酸對(duì)大鼠耳蝸毛細(xì)胞損傷及谷氨酰胺合成酶表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：目的：觀察體外培養(yǎng)的大鼠毛細(xì)胞暴露在外源性谷氨酸環(huán)境下的損傷情況。
　　 方法：將出生3天的新生SD大鼠33只分Ⅰ～Ⅺ組，每組3只取基底膜，去掉頂回后培養(yǎng)24小時(shí)后，Ⅰ～Ⅵ組分別加入不同濃度的谷氨酸(0.1mM，0.5mM，1.0 mM，5.0 mM，10 mM,20 mM)；Ⅶ～Ⅹ組分別在同一谷氨酸濃度(20mM)下作用 6H,12H,24H,72H；Ⅺ組為正常對(duì)照組。用免疫熒光染色的方法(phalloidin和DA

2、PI染色)觀察毛細(xì)胞胞核和纖毛，每個(gè)樣本在顯微鏡下隨機(jī)取3個(gè)不同視野計(jì)數(shù)內(nèi)毛細(xì)胞纖毛之和，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：①培養(yǎng)24h后，Ⅰ組內(nèi)毛細(xì)胞沒有出現(xiàn)明顯損傷，纖毛排列整齊，無錯(cuò)位、倒伏、缺失。Ⅱ～Ⅵ組，內(nèi)毛細(xì)胞均出現(xiàn)損傷，并伴有纖毛紊亂，倒伏，缺失。②在20倍的物鏡下觀察，Ⅶ～Ⅺ組內(nèi)毛細(xì)胞纖毛數(shù)分別為106.83±2.787、75.00±3.742、59.33±2.582、46.17±3.920、109.50±2.168

3、，Ⅶ～Ⅹ組與正常對(duì)照組比較內(nèi)毛細(xì)胞纖毛數(shù)減少(p<0.05)，并且殘存的纖毛數(shù)與暴露在谷氨酸中的時(shí)間呈量效關(guān)系(p<0.05)；③在60倍的物鏡下觀察,20mM谷氨酸作用24小時(shí)后，基底膜中回內(nèi)毛細(xì)胞纖毛的殘存數(shù)(47.33±3.983)比底回內(nèi)毛細(xì)胞纖毛的殘存數(shù)(33.17±4.579)要多(p<0.05)。
　　 結(jié)論：：①外源性谷氨酸對(duì)體外培養(yǎng)基底膜的內(nèi)毛細(xì)胞最小損傷濃度約為0.5mM；②體外培養(yǎng)的基底膜暴露在20mM谷氨

4、酸環(huán)境中，內(nèi)毛細(xì)胞6H開始出現(xiàn)損傷，12H后有明顯纖毛缺失，并且隨著暴露在谷氨酸中的時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，纖毛缺失得越厲害；③暴露在相同濃度和相同時(shí)間的谷氨酸環(huán)境中，基底膜底回的內(nèi)毛細(xì)胞損傷和纖毛缺失要比中回的嚴(yán)重。
　　 第二部分：目的：探討大鼠耳蝸谷氨酰胺合成酶表達(dá)部位和導(dǎo)入外源性谷氨酸后其表達(dá)的變化。
　　 方法：成年SD大鼠40只，分成Ⅰ～Ⅵ組，Ⅰ組10只為正常對(duì)照組，Ⅱ～Ⅵ組為手術(shù)組，每組6只。其中Ⅱ組導(dǎo)入

5、外淋巴液，Ⅲ～Ⅵ組分別為20mM谷氨酸導(dǎo)入后12h，1天,3天,7天組。利用免疫組織化學(xué)、蛋白免疫印記法觀察大鼠耳蝸內(nèi)谷氨酰胺合成酶的分布和表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：谷氨酰胺合成酶在耳蝸Corti器內(nèi)支持細(xì)胞，螺旋神經(jīng)節(jié)周圍膠質(zhì)細(xì)胞和骨螺旋板內(nèi)均有表達(dá)；導(dǎo)入谷氨酸后1天組谷氨酰胺合成酶表達(dá)增多(p<0.05)，對(duì)照組，12h、3天、7天組與正常組表達(dá)無差異(p>0.05)。
　　 結(jié)論：谷氨酰胺合成酶在耳蝸Corti器內(nèi)支