rhIGF-I明膠微球的制備及對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的：制備人重組胰島素樣生長因子-Ⅰ明膠微球(recombinant human insulin-likegrowth factor-Ⅰ gelatin microspheres，rhIGF-Ⅰ-GMs)，觀察其一般性質(zhì)、體外釋藥特性及其對(duì)人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPDLFs)的增殖及合成Ⅰ型膠原的影響。從而初步探討rhIGF-Ⅰ-GMs對(duì)rhIGF-Ⅰ的緩釋作用

2、，及其對(duì)HPDLFs作用的時(shí)間和濃度效果，為其在牙周組織工程中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：用改良乳化冷凝聚合法制備rhIGF-Ⅰ-GMs，掃描電鏡(scanning microscope，SME)觀察其一般性質(zhì)；rhIGF-Ⅰ-ELISA試劑盒測定rhIGF-Ⅰ的含量，計(jì)算微球包封率和載藥率及繪制微球體外釋藥曲線。取第4代生長狀態(tài)良好的HPDLFs用于實(shí)驗(yàn)。將制備好的rhIGF-Ⅰ-GMs作用于HPDLFs，實(shí)驗(yàn)分為三組：

3、rhIGF-Ⅰ-GMs組(加入rhIGF-Ⅰ-GMs，依據(jù)微球含rhIGF-Ⅰ相對(duì)于培養(yǎng)液(Dubecco's modified eagle medium，DMEM)的終濃度再分為1，5，10，50和100μg/L5個(gè)濃度組)、rhIGF-Ⅰ組(加入rhIGF-Ⅰ，依據(jù)rhIGF-Ⅰ相對(duì)于DMEM的終濃度再分為1，5，10，50和100μg/L5個(gè)濃度組)和對(duì)照組(不加rhIGF-Ⅰ)，用四唑鹽比色法(methyl thiazolyl

4、tetrazolium，MTT)和羥脯氨酸試劑盒(消化法)動(dòng)態(tài)觀察其對(duì)HPDLFs增殖及合成Ⅰ型膠原的影響。
　　 結(jié)果：(1)所制備的微球表面光滑圓整，球體均勻度好，平均粒徑為(12.51±3.53)μm，凍干粉劑為黃白色粉末狀，再分散性良好，微球載藥量和包封率分別為920ng/g和92.0％，體外7d內(nèi)藥物緩釋72.5％，35d可降解；(2)HPDLFs呈星形或長梭形，核呈圓形或卵圓形，有2～4個(gè)胞漿突起，核仁清晰可見，呈漩

5、渦狀、柵欄狀、放射狀外觀生長，為典型的成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞活性好；(3)rhIGF-Ⅰ和rhIGF-Ⅰ-GMs均明顯促進(jìn)HPDLFs增殖及合成Ⅰ型膠原的效果(P＜0.05)，rhIGF-Ⅰ-GMs較單獨(dú)應(yīng)用rhIGF-Ⅰ的效果更加顯著(P＜0.05)，呈濃度及時(shí)間依賴性。
　　 結(jié)論：rhIGF-Ⅰ-GMs凍干粉劑制備良好；rhIGF-Ⅰ-GMs在7d內(nèi)對(duì)rhIGF-Ⅰ有良好的緩釋作用；HPDLFs形態(tài)和活性良好可以用于實(shí)驗(yàn)研