TGF-β1對人牙周膜成纖維細胞分泌MMP-1調(diào)控作用的初步研究.pdf

1、牙根吸收是正畸治療的常見并發(fā)癥之一。有學(xué)者指出在完成正畸治療后，幾乎所有的患者都會出現(xiàn)一定程度的牙根吸收。目前對于牙根吸收問題的處理一般是從預(yù)防入手，即矯治過程中要控制矯治力的使用，避免使用過大矯治力、避免超限矯治，但這并不能完全杜絕牙根吸收的發(fā)生。而一旦發(fā)生牙根吸收，目前臨床上一般的處理措施就是停止正畸加力作用，觀察其變化。這種被動的觀察性處理措施有時會讓正畸醫(yī)生喪失對牙根吸收的控制，且即便停止加力，牙根的吸收仍有一定的持續(xù)性。如對一

2、些正畸治療后復(fù)發(fā)的病人進行二次矯治，牙根吸收又會出現(xiàn)新的進展。因此從牙根吸收的機制入手，尋找牙根吸收的預(yù)防、阻斷途徑是有必要的。很多關(guān)于正畸治療與牙根吸收關(guān)系的研究表明,在治療過程中基質(zhì)金屬蛋白酶（MatrixmetalloproteinaseMMPs）對于牙周組織的改建起著至關(guān)重要的作用,其中屬于膠原酶類的MMP-1可由人牙周膜成纖維細胞（HumanperiodontalligamentfibroblastsHPDLFs）表達分泌，其

3、作用底物為細胞外基質(zhì)中的I,II,III,VII,X型膠原纖維，而牙周膜及牙骨質(zhì)的主要纖維構(gòu)成恰是I和III型膠原纖維。由此不難推斷MMP-1的表達分泌直接影響到牙周組織的改建，與牙根吸收的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而HPDLF細胞則是牙周組織中數(shù)量最多,功能最重要的細胞。研究表明包括TGF-β1在內(nèi)的多種生物因子均能夠調(diào)節(jié)HPDLF細胞的活性,進而影響牙周組織改建。TGF-β1是一種具有多項調(diào)節(jié)功能的生物因子，有文獻提示其在牙根吸收的發(fā)生、

4、發(fā)展過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。那么TGF-β1究竟是通過什么樣的生物學(xué)途徑，影響到牙周組織的改建？是否會通過調(diào)控HPDLF細胞分泌MMP-1進而調(diào)節(jié)牙根吸收的進程？本研究旨在通過研究TGF-β1對人牙周膜成纖維細胞分泌MMP-1的調(diào)控作用，進而探討TGF-β1在牙根吸收發(fā)生、發(fā)展過程中的具體生物功能，是抑制、阻礙還是會促進其發(fā)展？以備為通過生物學(xué)途徑建立正畸過程中牙根吸收的防治策略提供理論依據(jù)和實踐基礎(chǔ)。本研究主要從以下兩個方面進行：<

5、br>　　實驗一HPDLF細胞體外分泌MMP-1的相關(guān)研究
　　目的：通過在體外原代培養(yǎng)HPDLF細胞，獲得性狀穩(wěn)定、狀態(tài)良好的人HPDLF細胞；后通過雙抗體夾心ELISA方法研究在無干預(yù)狀態(tài)下，體外培養(yǎng)HPDLF細胞分泌MMP-1的情況，為下一步研究TGF-β1的生物功能打下基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.體外分離培養(yǎng)HPDLF細胞
　　2.應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法檢測HPDLF細胞在沒有特定生物因子干預(yù)狀態(tài)下

6、分泌MMP-1的情況。
　　結(jié)果：
　　1.原代培養(yǎng)HPDLF細胞從組織塊中爬出時間為10～14天,細胞為長梭形或多突起星形,由細胞形態(tài)和組織來源可鑒定該細胞確為人牙周膜成纖維細胞。傳代后細胞生長旺盛,狀態(tài)良好,性狀穩(wěn)定。
　　2.經(jīng)雙抗體夾心ELISA方法檢測，在無特定生物因子干預(yù)狀態(tài)下HPDLF細胞上清中MMP-1含量的均值為6.542ng/ml。
　　結(jié)論：分離培養(yǎng)所獲得的HPDLF細胞在體外環(huán)境下能夠分泌

7、MMP-1出胞，表明本階段實驗所收獲HPDLF細胞可作為MMP-1來源細胞，為第二階段研究TGF-β1對HPDLF細胞分泌MMP-1的調(diào)控作用打下基礎(chǔ)。
　　實驗二TGF-β1對HPDLF細胞分泌MMP-1調(diào)控作用的相關(guān)研究
　　目的：通過研究TGF-β1在體外對HPDLF細胞分泌MMP-1的影響，闡明TGF-β1對HPDLF細胞分泌MMP-1的調(diào)控作用，進而探討TGF-β1在牙根吸收過程中的生物功能，以期為通過生物學(xué)途徑建

8、立正畸過程中牙根吸收的防治策略提供理論依據(jù)和實踐基礎(chǔ)。
　　方法：分別設(shè)立TGF-β1對HPDLF細胞作用的濃度梯度和時間梯度，采用雙抗體夾心ELISA方法檢測各實驗樣本HPDLF細胞上清中MMP-1的分泌量，以明確HPDLF細胞分泌MMP-1與TGF-β1的作用是否同時存在劑量依賴性和時間依賴性。
　　結(jié)果：經(jīng)多元線性回歸分析，以P=0.05為檢驗水準；與對照組相比，按TGF-β1工作濃度所分各實驗組細胞上清中MMP-1含

9、量與TGF-β1的作用時間總體上存在時間依賴性，具有統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05。在實驗設(shè)計的48h內(nèi)，TGF-β1作用時間越長，所檢測到各實驗樣本HPDLF細胞上清中MMP-1的濃度越高。但在不同作用時間下MMP-1分泌量與TGF-β1的工作濃度并沒有表現(xiàn)出一致的劑量依賴關(guān)系：4h時各實驗組MMP-1分泌量隨TGF-β1濃度的遞增而下降；8h、12h、24h時，各實驗組MMP-1分泌量與TGF-β1的工作濃度基本呈正相關(guān)；48h時各組MM

10、P-1分泌量變化較大沒有明顯趨勢。
　　結(jié)論：MMP-1分泌量與TGF-β1作用時間存在顯著的時間依賴性。而在各TGF-β1作用時間梯度下，MMP-1的分泌量與TGF-β1的工作濃度并沒有一致的劑量依賴關(guān)系?；诒狙芯拷Y(jié)果，我們推測通過抑制或降低牙根吸收發(fā)生區(qū)域TGF-β1的生物活性、減少其作用時間，從而抑制或下調(diào)HPDLF細胞表達、分泌MMP-1，降低局部MMP-1濃度，減緩其對細胞外基質(zhì)中膠原纖維的降解，可達到干預(yù)、阻礙牙根吸