環(huán)孢素A、他克莫司對上皮細(xì)胞灌注后大鼠氣管異位移植再上皮化的影響.pdf

1、目的:
　　 探討細(xì)胞灌注技術(shù)在細(xì)胞種植中的應(yīng)用及免疫抑制劑對同種異體大鼠氣管異位移植再上皮化的影響。
　　 方法:
　　 SD大鼠氣管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)，制作細(xì)胞懸液(10×106/ml)。Wistar大鼠作為供體，SD大鼠作為受體。免疫抑制劑組：將Wistar大鼠氣管上皮細(xì)胞消化后制作成裸氣管，灌入SD大鼠氣管上皮細(xì)胞懸液，移植于SD大鼠背部皮下，每日給予環(huán)孢素A(CsA)及他克莫司(FK506)處理；非免疫抑

2、制劑組：未予以免疫抑制劑處理，余步驟同免疫抑制劑組；空白對照組：將Wistar大鼠氣管灌入生理鹽水，移植于SD大鼠背部皮下。分別于移植后5天、10天、20天及30天獲取標(biāo)本，免疫組織化學(xué)染色CK14、CK18和CFTR鑒定氣道上皮細(xì)胞分化，Ki-67鑒定上皮細(xì)胞增殖情況；移植后30天的標(biāo)本行HE染色評價氣道上皮的完整性、分化程度、粘膜下炎癥細(xì)胞浸潤和纖維組織增生情況，透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　 結(jié)果:
　　 術(shù)后

3、30天標(biāo)本HE染色結(jié)果顯示：免疫抑制劑組粘膜上皮完整，氣管管腔可見分化良好的纖毛上皮，粘膜下輕度纖維組織增生和炎細(xì)胞浸潤；非免疫抑制劑組粘膜上皮基本完整，主要為扁平上皮，粘膜下纖維組織增生、炎細(xì)胞浸潤明顯；空白對照組粘膜上皮不明顯，纖維組織明顯增生，大量炎性細(xì)胞浸潤，氣管官腔堵塞(p=0.023)。免疫組化結(jié)果顯示：免疫抑制劑組術(shù)后晚期氣管上皮細(xì)胞CK14、CK18和CFTR表達(dá)陽性，術(shù)后早期Ki-67表達(dá)陽性，晚期表達(dá)活性降低；非免疫

4、抑制劑組上皮表達(dá)以上抗原較弱，熒光免疫未見顯示；對照組管腔閉塞，無陽性顯示。透射電鏡顯示免疫抑制劑組可見纖毛上皮結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞器形態(tài)正常，細(xì)胞間連接緊密：非免疫抑制劑組則見較稀疏的扁平上皮細(xì)胞，并可見大量的空泡和凋亡的細(xì)胞。
　　 結(jié)論:
　　 1、體外培養(yǎng)的上皮細(xì)胞可以通過灌注技術(shù)達(dá)到細(xì)胞種植的目的，在異系受體鼠體內(nèi)形成具有較為完整的屏障功能的上皮結(jié)構(gòu)。
　　 2、免疫抑制劑減少炎癥反應(yīng)，有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁、增殖