西羅莫司對(duì)馬兜鈴酸致大鼠小管上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:探討不同濃度西羅莫司(SRL)對(duì)馬兜鈴酸(AA)引起的大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E)結(jié)構(gòu)損傷的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法:采用MTT比色法觀察不同濃度0、0.1、1、10、50、100、200、500、1000nmol/L SRL對(duì)NRK-52E細(xì)胞的增殖抑制;采用LDH法檢測(cè)上述濃度SRL對(duì)NRK-52E細(xì)胞的毒性。本實(shí)驗(yàn)SRL終濃度選用≤100nmol/L由上述方法得出。加入適當(dāng)SRL使各實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)液中SRL濃度

2、分別為0、0.1、1、10、50、100nmol/L，刺激NRK-52E細(xì)胞12h后分別加入40ug/ml AA繼續(xù)培養(yǎng)48h，另設(shè)空白對(duì)照組，分別用Hoechst33342熒光染色觀察各組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)各組NRK-52E細(xì)胞凋亡比例，酶標(biāo)儀法檢測(cè)各組caspase-3表達(dá)活性。
　　結(jié)果:
　　1.MTT試驗(yàn)顯示SRL濃度在100nmol/L及以下時(shí)細(xì)胞增值抑制率在5％以下，200、500、

3、1000nmol/L時(shí)增值抑制率分別為8.6％、12.1％和17.2％。LDH試驗(yàn)提示SRL濃度在100nmol/L以下時(shí)細(xì)胞毒性指數(shù)小于5％，200、500、1000nmol/L細(xì)胞毒性指數(shù)分別為9.2％、16.5％和21.9％。
　　2.Hoechst33342熒光染色可見從組出現(xiàn)大量細(xì)胞核染成亮藍(lán)色，染色質(zhì)出現(xiàn)邊集的凋亡細(xì)胞，空白對(duì)照組凋亡細(xì)胞則顯著減少。10nmol/L以下SRL溶液組NRK-52E凋亡與從組相比無明顯變化

4、，10nmol/L及以上SRL溶液組NRK-52E凋亡與AA組相比有所減少，且隨濃度梯度增加趨勢(shì)愈明顯。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡比例如下:空白對(duì)照組:0.9％;AA組:30.1％; AA+0.1 nMSRL:29.9％; AA+1.0nMSRL;24.9％;AA+10 nMSRL:15.0％; AA+50 nM SRL:13.2％; AA+100 nM SRL:10.9％。
　　4.各試驗(yàn)組caspase-3活性

5、測(cè)定OD值如下:空白對(duì)照組:0.39; AA組:1.0; AA+0.1 nM SRL:0.99; AA+1.0 nM SRL:0.98; AA+10 nM SRL:0.92;AA+50 nM SRL:0.79;AA+100 nM SRL:0.68。
　　結(jié)論:
　　1.SRL濃度在100mmol/L及以下時(shí)對(duì)NRK-52E細(xì)胞增殖無明顯抑制及毒性作用，200mmol/L及以上濃度時(shí)增殖抑制及毒性作用明顯。
　　2.10