防治甜瓜枯萎病木霉菌REMI變異株篩選及生物安全性評(píng)價(jià).pdf

1、利用REMI技術(shù)進(jìn)行木霉菌株改良是一個(gè)比較實(shí)用、有效的方法，可克服傳統(tǒng)木霉菌穩(wěn)定性差、防治效果不理想之不足。本文首先對(duì)本實(shí)驗(yàn)室成功構(gòu)建的木霉菌REMI轉(zhuǎn)化體是否存在假陽(yáng)性問(wèn)題做了鑒定。在此基礎(chǔ)上，系統(tǒng)測(cè)定了木霉菌REMI變異株對(duì)甜瓜枯萎病的防治效果，同時(shí)對(duì)防治甜瓜枯萎病具有明顯效果的木霉菌REMI變異株的安全I(xiàn)生進(jìn)行了研究。通過(guò)木霉菌REMI變異株對(duì)宿主植物(農(nóng)作物和雜草)生長(zhǎng)、根際土壤中主要微生物種群以及對(duì)水資源安全性、魚苗生長(zhǎng)等生態(tài)

2、因子的影響研究，明確了木霉菌REMI變異株的生物安全性，為今后木霉菌REMI變異株在生物防治中的安全應(yīng)用提供了理論依據(jù)。 采用繼代培養(yǎng)、抗潮霉素檢測(cè)和PCR分子檢測(cè)相結(jié)合的方法，確定了125個(gè)轉(zhuǎn)化體(變異株)是由質(zhì)粒插入到初發(fā)菌株T21染色體中，且生長(zhǎng)特性穩(wěn)定。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)假轉(zhuǎn)化體存在，需要進(jìn)一步采用Southern blotting來(lái)檢測(cè)。 通過(guò)PDA固體和PD液體培養(yǎng)篩選，從125個(gè)木霉REMI變異株篩選出22株生長(zhǎng)速

3、度快、產(chǎn)孢量大的優(yōu)良菌株。22株木霉菌變異株對(duì)甜瓜枯萎病的防治試驗(yàn)表明，多數(shù)變異株的防效明顯高于初發(fā)菌株T21，其中Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5個(gè)變異株的防效最好。Trtrm42、Ttrm26的室內(nèi)防效為78.7％和74.7％，田間防效也分別達(dá)到78.1％和73.0％，顯著高于對(duì)照苗菌敵的相對(duì)防效。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，用Ttrm42和Ttrm26處理的甜瓜植株，生長(zhǎng)健壯，葉片呈深綠色。 針對(duì)防

4、治甜瓜枯萎病效果明顯的變異株，研究了其在甜瓜根際土壤中的定殖，結(jié)果表明，Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5個(gè)變異株均可以在甜瓜根際土壤中定殖，其中Ttrm42的定殖能力最強(qiáng)。 通過(guò)研究Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102變異株對(duì)其宿主生長(zhǎng)的影響發(fā)現(xiàn)，多數(shù)變異株對(duì)甜瓜種子和玉米種子安全，并且可以提高種子的出苗率、增長(zhǎng)胚根和增加須根數(shù)，還可增加地上鮮重；大部分

5、木霉菌變異株對(duì)甜瓜和玉米葉長(zhǎng)、葉寬及株高等地上部生長(zhǎng)性狀有明顯促進(jìn)作用，且植株健康無(wú)病，葉片大、葉色綠、須根多；Ttrm25、Ttrm26和Ttrm102能夠促進(jìn)稗草生長(zhǎng)、增加地上鮮重和地上干重；Ttrm25、Ttrm26、Ttrm53、Ttrm102及初發(fā)菌株T21對(duì)反枝莧的生長(zhǎng)有顯著的抑制作用；Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53及初發(fā)菌株T21對(duì)苘麻地上部分的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。 木霉菌變異株對(duì)甜瓜根際

6、主要微生物種群數(shù)量有明顯影響。Ttrm102、Ttrm26、Ttrm42處理的甜瓜根際土壤的真菌數(shù)量與對(duì)照相比明顯減少，其中Ttrm42處理的真菌數(shù)量最少；Ttrm53、Ttrm102處理的甜瓜根際土壤的細(xì)菌數(shù)量與對(duì)照相比有所增加；木霉菌變異株對(duì)甜瓜根際放線菌的種群數(shù)量影響相對(duì)較小。關(guān)于木霉菌變異株對(duì)水資源的安全性及對(duì)魚類的影響。木霉菌變異株的孢子在自來(lái)水和和河水中均不萌發(fā)，存活能力較差，菌體自行消解。所以，對(duì)水資源不能造成污染，對(duì)魚類