擬康氏木霉和黑根霉對枯萎病的協(xié)同防治作用.pdf

1、土傳病害是指生活在土壤中的病原微生物，在條件適宜時，從作物根部或莖部侵害作物而引起的病害。由于連茬耕作、長期施用化肥等問題，導(dǎo)致土壤中有害微生物的種類和數(shù)量增加，有益微生物的種類和數(shù)量急劇減少，微生物區(qū)系嚴重失調(diào)，土傳病害進一步加重。枯萎病是一種真菌性土傳病害，尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)是引起該病害的主要病原菌，該菌株從根部侵染植物，破壞植物維管束，導(dǎo)致植物枯死，對棉花、番茄、黃瓜、冬瓜、甜瓜、絲瓜等經(jīng)濟作物危害

2、嚴重。
　　本研究以枯萎病為研究對象，利用對峙實驗、發(fā)酵實驗、盆栽實驗、田間試驗、生物統(tǒng)計相結(jié)合的方法，系統(tǒng)研究黑根霉（Rhizopus nigricans）和擬康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）對植物枯萎病的協(xié)同防治作用。
　　本研究主要取得以下研究結(jié)果及結(jié)論:
　　1.生防菌的篩選:利用對峙實驗測定5種絲狀真菌包括黑根霉(R.nigricans)、擬康氏木霉（T.pseudokonin

3、gii）、擬康氏木霉Ⅰ(T.pseudokoningiiⅠ)、對植物枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌的4種?；停S瓜專化型、山藥專化型、茄科?；?、禾谷?；停┖椭参锘颐共〔≡移咸焰撸˙otrytis cinerea）的抑制效果，結(jié)果表明，5種生防菌對5種病原菌均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。其中，黑根霉和擬康氏木霉對5種病原菌都有較為明顯的抑制作用，抑制率均高于55.0％。所以，以下實驗選擇黑根霉和擬康氏木霉為研究對象，進一步分析其對枯萎病防

4、治效果。
　　2.混合發(fā)酵:以擬康氏木霉作為目標菌，黑根霉作為挑戰(zhàn)菌，將黑根霉和擬康氏木霉按照不同比例接種量(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5)接入到PDB培養(yǎng)基，進行混合發(fā)酵10天。利用菌絲生長速率實驗測定生防菌發(fā)酵液對尖孢鐮刀菌黃瓜轉(zhuǎn)化型和灰葡萄孢的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黑根霉發(fā)酵液和擬康氏木霉發(fā)酵液對兩種病原菌的抑制率分別為17.6％和47.1％、77.2％％和55.9％;1∶1和1∶2接種量的混合發(fā)酵，提高了發(fā)酵液對病

5、原菌的抑制率，分別達到85.3％、67.6％、85.3％、70.6％;1∶3、1∶4、1∶5反而降低了發(fā)酵液的抑菌效果。以下所用擬康氏木霉和黑根霉混合發(fā)酵液均為按照1∶1接種量發(fā)酵。
　　3.生防菌發(fā)酵液對黃瓜枯萎病的防治效果:溫室條件下，通過傷根處理的方法，在黃瓜根部接種107 cfu/ml的尖孢鐮刀菌孢子懸浮液，黃瓜發(fā)病率達100％。與只接種病原菌的對照組相比，擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率分別為68.

6、7％、75.0％，相對防效分別為31.2％、25.0％。黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率為56.3％，相對防效為43.7％，表明黑根霉和擬康氏木霉的混合發(fā)酵液對黃瓜枯萎病的防治效果比單一生防菌的防治效果強。
　　4.病原菌的定量追蹤:利用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白標記的病原菌在黃瓜植株各組織內(nèi)的含量，結(jié)果表明，在黃瓜植株根莖部出現(xiàn)褐變現(xiàn)象時，與病原菌處理的對照組相比，黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最高，黑根霉

7、和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最低。
　　5.實時定量PCR實驗檢測黃瓜各組織及土壤中尖孢鐮刀菌的含量:尖孢鐮刀菌通過在根際土壤中定殖，侵染植物根系，進而侵染到植物根莖部的維管束組織，此時，植物的根莖部會出現(xiàn)褐變現(xiàn)象，植株開始萎焉。對黃瓜莖稈中的病原菌進行定量，結(jié)果表明，黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組、擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的抑制率分別為22.7％、18.5％、11.9

8、％;對黃瓜根系中的病原菌進行定量，三種處理組的抑制率分別為24.3％、17.1％、7.2％;對黃瓜根際土壤中的病原菌進行定量，三種處理組的抑制率分別為20.5％、10.6％、6.9％。該結(jié)果進一步表明，黑根霉和擬康氏木霉協(xié)同作用抑制了病原菌的侵染。
　　6.植物酶活實驗測定黃瓜防御酶的變化趨勢:通過對五種處理的不同時間段進行取樣，檢測過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶活變化趨勢，結(jié)果表明，

9、與單一生防菌發(fā)酵液相比，混合生防菌發(fā)酵液處理組的黃瓜防御酶反應(yīng)速率最快，維持時間最長。
　　7.田間實驗:通過對試驗田進行兩年的處理，從第一次用黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理對棉花枯萎病的沒有防治效果，到經(jīng)過五次處理之后，對棉花枯萎病的相對防效達到76.5％，并且棉花的株高，葉片濃綠程度及棉花花鈴數(shù)都有顯著的提高。
　　綜上所述，本文通過尖孢鐮刀菌篩選出具有生防作用的黑根霉和擬康氏木霉，用這兩種真菌菌株制成的生物菌劑，具有